인공적으로 만든 흰쥐 흉터에 동종 각질세포 이식 실험

세포의 잠재력을 사용하려는 욕망과 흉터의 미적 외관을 개선하기위한 새로운 효과적인 방법을 찾아야 할 필요성으로 인해 흉터 표면에 각화 세포 이식의 가능성을 연구하려고 시도했습니다.

실험적인 작업 흉터 표면에 생성 된 흰색 실험실 쥐에서 수행 된 흉터의 모양을 향상시키기 위해 각질 세포 문화를 사용할 수있는 가능성을 증명하기 위해. 흉터 모델 쥐 인위적으로 척추를 따라, 뒷면에 입은 상처를 치유하여 제조 하였다. 쥐 × 3 센티미터의 동일한 가죽 크기의 조각을 절단 하였다. 조작 "시뮬레이션 흉터"쥐 후 2.5 개월 후 젊은 쥐 2-4일의 피부에서 고립 된 박피술 수술 및 이식 동종 각질합니다 (ignioperation의 반추위를 통해 상위 계층의 제거)를 실시 하였다 출생 후.

랫 표피 세포의 분리 및 성장은 다음 기술의 세포 학 RAS 연구소의 세포 기술 연구소에서 수행되었다.

스킨 (200)은 U를 함유하는 행크의 식염수로 세정 / ml의 겐타 마이신, 작은 조각, 0.2-0.5 cm의 면적으로 절단 ². 피부 큐브를 37 ℃에서 1 시간 동안 평형 염수 인산염 완충액에서 디스 테아 제의 0.5 % 용액으로 배양 하였다. 그 후 조각을 둘 베코 인산염 완충 생리 식염수로 옮기고 표피를 진피에서 분리 하였다. 표피는 효소를 5 % 소 태아 혈청을 첨가하여 정지시킨 후 50 REV / 분의 속도로 교반하면서 10-15 분 동안 0.125 % 트립신 용액으로 배양 하였다. 기판없이 배양 접시에 - 생성 세포 현탁액 1/3 흉터 이식 옵션 중 하나 순수한 형태로 사용하고, 두 번째 세 번째 국내 생체 필름 코팅 "Polipor"제 성장. 동작 박피술들을 후속 전송과 소작 래트를 사용하여 수행 하였다 에테르 마취하에 래트 epidermotsitov 흉터를 획득.

연마에 박피술 후 쥐의 첫번째 군, 식염수로 세척하고, 건조시켜 표면 살균 반추위 증착 된 잔디의 부분 중첩은 (세포학 연구소에 따라) 1 mL의 150 만 개 세포의 농도 동종 쥐 epidermotsitov 슬러리를 스크램블링. Batistovye 조각은 연마 된 흉터에 적합하여 세포가 흉터 표면에 놓 이도록합니다. 거즈의 여러 층의 붕대가 흉터의 가장자리에 수 놓은 위에 꿰매어졌습니다.

생성 된 세포 현탁액의 일부를 페트리 접시에 도금 한 후 무균 Polypore 필름으로 컵 모양으로 자르고 나머지 부분은 필름없이 페트리 접시에 담았다. 배양은 DMEM과 F12 배지의 혼합물로 구성된 FAD 배지에서 3 : 1 비율로 수행 하였다. 10 % 소 태아 혈청, 5 ㎍ / ㎖ 인슐린 (Sigma), 0.5 μg / ml 히드로 코르티 존 헤미 석시 네이트 (Sigma)를 첨가 하였다. 10 ㎍ / ml 표피 성장 인자 EGF (Institute of Cytology RAS, St. Petersburg). 7 명의 개체를 가진 두 번째 및 세 번째 쥐 그룹은 첫 번째 개체에서 6 일 후에 운영되었다. 이 시간까지, 쥐에 이식 된 페트리 접시에 파우더 케 라티노 사이트의 현탁액으로 다층 지층이 형성되었다. 두 번째 그룹은 기질이없는 다층 층을 갖는 필름 상에 표피 세포를 이식 하였다. 7 일 후, Polypore 필름에 뿌려진 alogic keratinocytes (MPALK)의 다층 층을 상처 표면에 직접 배양하여 이식 하였다. 위의 필름은 리핑을 피하기 위해 다층 거즈 드레싱으로 고정시키고 쥐의 피부에 수 놓습니다.

각질 세포를 쥐의 세번째 군을 이식하기 전에, 선택적 더모 표피 통신을 중단 할 수있는 능력을 갖는 페트리 접시 디스 파제 처리의 바닥에서 PAC의 분리를 생성하지 않고 성장 기판. 다층 저수지 디스 파제의 작용 페트리 접시의 바닥에 기저 세포 층의 연결을 파괴하고 훨씬 적은 정도, 그것은 가능한 전체 레이어를 "제거"할 수 세포 간 통신에 영향을 미친다. 처분에 의한 다층 세포층의 박리는 다음과 같이 행 하였다. 수송 배지를 페트리 접시에서 배수시키고, 세포층을 항생제, 특히 겐타 마이신 (0.2 mg / ml)을 함유하는 영양 배지로 3 회 세척 하였다. 적층 층 0,125퍼센트의 디스 파제 용액 («시그마»)을 붓고, 그들이 (20-30) = t 분 동안 37 ° C를 배양 배양기에 넣었다. 형성의 가장자리에서 떨어져 나와 하얀 화관의 모양은 페트리 접시의 가장자리와 바닥에서 그것을 분리하는 과정의 시작의 표시입니다. 분리 과정의 시작 몇 분 후, disaspase의 솔루션은 병합, 상피 레이어는 매체로 2-3 번 씻어. 표피층의 표면 도포에 크기 컵 부재 멸균 상처 드레싱 절단 "벽개 LEITH 색이 주걱 디스 파제 형성 컵의 저부의 상기 박리 분리. 생리대의 코팅과 함께 층 안과 핀셋을 사용하여"( "LEITH 색 러시아어 ) 멀리 배양 접시의 바닥에서 조심스럽게 파산 흉터의 준비된 표면에 옮겼다. 냅킨 "리타 컬러는"습기가있는 것은 미래의 새싹 남아 조성 및 겐타 마이신 eksolin (콜라겐 추출물)에 포함 셈의 식염수는 급증으로 인한 구조와 초기 습윤 외부 감염과 빠른 치료에서 좋은 보호를 제공하는 현대적인 상처 코팅되었다.

Polyprop 필름과 Lita-color 냅킨은 튼튼한 고정을 위해 쥐의 피부에 수 놓은 거즈 붕대로 겹쳐졌습니다. 각각의 래트를 이식 된 각질 형성 세포의 유지 및 이식을위한 최적의 조건을 만들기 위해 별도의 케이지에 심었다. 멸균 식염수에 적신 매일 매일 여러 번 서스펜션과 다층 저수지 epidermotsitov 샷 디스 파제를 이식 붕대 쥐, 생착에 가장 유리한 조건을 세포를 만들 수 있습니다. "Polypor"필름이 물에 불 투과성 이었으므로 두 번째 그룹의 쥐들은 필름이없는 이식에 비해 장점 인 드레싱을 적시 지 않았다. 10 일 후에 붕대가 제거되었습니다. 세포 이식 후 흉터의 임상상은 이식을하지 않은 흉터와는 달리 분홍색 색소 (박피술로 인한 것)와 더 큰 박리를 제외하고는 약간 달랐다. 이 사실은 그 사실을 암시합니다. IPC로 상처 덮개가 사라지 자마자 반추위에서 어떤 변화도 일어나지 않았다.

쥐에서 생검 물질 복용.

백색 쥐의 흉터에 rat alogic keratinocytes를 옮긴 후 1, 2, 5, 9 개월 후에 조직 학적, 세포 형태 학적 및 전자 현미경 적 검사를 시행 하였다. 대조군으로서 정상 랫트 피부와 흉터 샘플을 세포 이식없이 채취 하였다. 쥐의 마취는 에테르 마취로 시행 하였다.

마취 후 각질 세포를 이식 한 표식 부위에서 직경 2 mm의 생검 용 천공 관을 사용 하였다. 흉터 조직 조각을 취하여 2.5 % 글루 타르 알데히드 용액에 넣고 전자 현미경 검사 용 물질을 제조 하였다. 조직학 검사를 위해 취한 조직 조각을 중성 포르말린의 10 % 용액에 넣고 영혼을 통해 배선하고 파라핀으로 붓고 극 미세 절편을 절단하여 광학 현미경으로 관찰했습니다.

Control I. 정상적인 쥐의 피부.

IPC 이식 후 특정 시간에 쥐와 흉터의 정상적인 흉터가 바뀐 피부의 현미경 사진의 차이를 확인하기 위해이 연구의 모든 단계에서 사진과 설명을 보여줍니다.

정상 피부의 표피는 7-9 층의 세포로 이루어져 있습니다. 알맞은 두께의 각질층. 장소에서는 6 ~ 8 층의 각질 비늘로 이루어져 있습니다. 기저층은 큰 빛, 규칙적인 핵 및 몇몇 nucleoli를 가진 원통 모양의 세포로 대표된다. 세포와 기저막 사이의 Desmosomal 연결이 명확하게 표현됩니다. 표피층 아래에 작은 돌출물이있는 잘 막혀있는 기저 막 아래에는 콜라겐과 엘라스틴 섬유의 섬세한 묶음이 있으며, 그 가운데 섬유 아세포, 작은 혈관의 길쭉한 형태가있다. 더 깊은 층에서는 콜라겐과 엘라스틴 섬유의 뭉치가 다른 방향으로 놓여 있습니다. 그 중에는 같은 구경의 얇은 벽, 세포 요소 (섬유 아세포, 비만 세포, 백혈구)가있는 많은 혈관이 있습니다. 많은 수의 모낭에서 피지 샘.

컨트롤 2. 2 개월 된 쥐의 흉터.

임상 사진. 흉터가 껍질을 벗기지 않는 옅은 분홍색으로 남아 있습니다. 이들 지역은 콜라겐 섬유의 수축으로 인해 감소 약 3.0-3.5 cm 될 수있다 ^:. 스킨 첨부 파일이 없습니다.

현미경 사진. 표피는 3 ~ 5 층의 세포로 이루어져 있으며, 둥근 모양의 기저 세포, 1 층의 정맥, 1 층의 각질 세포와 1-2 층의 각질 세포로 구성되며, 세포 내 부종이있다. 각막 층은 매우 얇은 것에서 두껍게 변형 된 것으로 이질적으로 변합니다. 반흔 조직의 (수축)으로 인한 반추위의 폴딩이 있습니다. 폴드는 유두층에 침투하여 용의자의 인상을줍니다. 표피와 진피의 경계는 직선이다. 기초 막은 어디에서나 추적 할 수 없습니다. 표피 아래층과 더 깊은 층의 아래쪽 부분에는 두껍고 느슨해 진 벽을 가진 배들이 있으며, 많은 사람들이 사라지고, 스테이 시스 현상이 나타난다. 혈관 주위 - 대 식세포의 집합체, 섬유 아세포. 대 식세포는 모세 혈관에서 나오는 적혈구를 둘러싸고 그들을 탐식합니다. 보다 표면적 인 층에는 작은 모세관이 있습니다. 표피 아래에 콜라겐 섬유가 느슨합니다. 반추위의 더 깊은 층에는 많은 섬유 모세포가있는 콜라겐 섬유의 굵은 묶음이 있습니다.

MPAl 쥐의 쥐의 각질 형성 세포를 이식한지 한 달 후의 쥐의 흉터.

임상 사진. 흉터가 분홍색으로 변함에 따라 직경이 감소하고 평균 2.5-3 cm ² 의 면적 감소 . 머리카락과 피지선이 없습니다.

기질이없는 MPALK와 MPALK를 이식 한 래트에서 얻은 물질을 현미경으로 관찰 한 결과는 실질적으로 동일하다. 그러나, 기술적으로 지원되지 않는 MPAlK와 작업을 훨씬 더 어렵고 힘든 것보다 기판에 MPAlK 성장, 그래서 우리는 재배 ( "기판") 계층 잔디의 기초로 사용 kertainotsitov 흉터 이식에 문제의 더 연구 할 때.

현미경 사진. 케라틴 세포가 좁고, 길쭉하고, 수직 인 모양과 콤팩트 한 배치를 가지는 거의 15-20 층의 표피의 비후가있다. 기저 세포는 평탄하지 않은 선으로 배열됩니다. 이들의 핵은 가볍고 크며 모양이 둥근 하나 또는 두 개의 뉴 클리오로 이루어져있어 높은 합성 및 증식 활성을 나타냅니다. 표피와 진피의 경계는 직선이다. 가시가 많은 층은 잘 발달되어 있으며 둥근 형태의 세포가 3-5 층으로 이루어져 있고 핵핵 세포가 2 개 있습니다.

기저막 바로 아래에 콜라겐 섬유의 조밀 한 빽빽한 뭉치가 있고, 빈 혈관과 평행하게 더 깊은 콜라겐 섬유가 조밀하고 빽빽한 뭉치에 모여 있습니다. 대다수의 섬유 아세포, 비만 세포 (시야에서 2-3), 대 식세포, 백혈구 및 빈 혈관 (벽이 느슨해져 있음)은 느슨하게 콜라겐 섬유에 위치하고 있습니다. 일부 혈관에서는 - 스테이 시스, 균일 한 요소의 붕괴. 혈관 주위 - 섬유 아 세포, 단일 림프구. 스킨 첨부 파일이 없습니다.

Keratinocyte 현탁액이 연마 된 흉터에 이식되면, 현미경 사진은 이전 사진과 다릅니다. 대부분의 동물에서 - 표피는 얇으며 세포의 5-6 층으로 구성됩니다. 하층은 둥근 불규칙한 모양의 핵이있는 불규칙한 다각형 모양의 세포로 이루어져있다. 표피층의 상태는 이식이없는 동물 그룹의 상태와 유사합니다.

이 경우 세포 이식을 수반하는 과정이 지연되거나 현탁액 형태로 이식 된 세포가 많이 손실 될 수 있습니다. 따라서, 현탁액의 형태로 각화 세포 이식에 의한 흉터 교정이 부적절하다는 결론이 내려졌다.

MPAl 쥐의 쥐 keratinocytes의 이식 2 개월 후 쥐의 흉터.

임상 사진. 상처는 가늘고 부드러워 보입니다. 장소에는 축농이 있고, 비늘이 있습니다.

현미경 사진. 각질층은 두꺼워지며, 각화 부전증이 있습니다. 표피는 두꺼워지며, 세포의 12-20 행으로 구성됩니다. 표피와 진피의 경계는 직선이다. 표피 아래의 섬세한 콜라겐 섬유는 아주 단단히 놓여 있습니다. 반추위의 깊은 층에서는 거친 큰 묶음으로 수집됩니다. 표피 아래 층에는 새로운 혈관 형성이 나타난다. 흉터 조직의 하부 층 - 표피의 표면에 평행 한 많은 빈 혈관. 큰 섬유 아세포는 반추위의 두께에 골고루 분포되어 있으며 거대하고 다면적이며 많은 대 식세포가 있습니다.

쥐 spermocytes의 MP의 이식 후 5 개월 쥐의 흉터.

임상 사진. 흉터는 부드럽고 벗겨지지 않고 매끈 해 보이며 단일 털이 있으며 밀도가 흉터 주변부에서 더 큽니다. 이는 흉터로의 모낭의 가장자리 내 성장과 모낭의 형성을 나타냅니다. 흉터 부위는 계속 감소합니다.

현미경 사진. 위층의 표피는 여전히 두껍고 (15-20 개, 때로는 30 개까지) 각질질 알갱이로 채워져 있습니다. 기초 막이 분명히 보인다. 그녀의 콜라겐 섬유 아래 느슨한 거짓말. 더 낮은 층에서 - 콜라겐은 더 강력하고 단단히 포장됩니다. 콜라겐의 광선 사이에는 많은 모세 혈관이 있습니다. 상부 층에서 빈 혈관의 수가 감소했습니다. 표피와 진피가 약간 물결 모양입니다. 흉터 조직에는 표피가 깊게 퍼져 있습니다. 콜라겐 섬유 중에는 새로 형성된 혈관이 있습니다. 단일 모낭과 피지선이 나타납니다.

IPA 쥐 표피 세포의 이식 후 9 개월 쥐의 흉터.

임상 사진. 흉터는 이전 용어와 비교할 때 훨씬 작아졌으며 면적은 평균 약 1.5-2.0 cm ² 입니다. 흉터는 얇은 머리카락, 특히 주변부에 불규칙하게 덮여 있습니다. 경미한 작은 판 스케일링은 유지됩니다.

현미경 사진.

표피는 더 얇아졌으며, 6-8 줄의 세포에서 나타 났으며, 쥐의 정상 피부의 표피 구조를 연상케하고, 세포의 밀도는 1mm 밖에 없었다. 더 높고 더 작습니다. 기저층은 둥근 원통형의 작은 셀로 구성됩니다. 기초 막은 잘 정의되어 있으며, hemidesmosomes가 명확하게 보인다. 표피 하층의 존재가 표피층에 기록되어있다. 유두층은 흉터의 전체 길이를 따라 표현됩니다. 이러한 사실은이 기간 동안 이식 된 각화 세포의 부착이 반추위의 하부 조직과 함께 상당히 강하게되었음을 보여줍니다. 따라서 IPC 이식 9 개월 후 MALC 이식 환자의 흉터 치료는 전통적 일 수 있습니다. 표피 아래에는 깊은 층보다 더 섬세한 콜라겐 섬유가 있습니다. 특히 표면적으로 많은 배들이있었습니다. 대형 선박에서는 벽이 두꺼워집니다. 모낭과 피지선이 대량으로 존재합니다. 미세한 패턴은 피부 조직과 유사합니다.

실험 작업 결과 및 토론.

기판없이 아마포 계층화 형성 현탁액으로서 동작 박피술 후 쥐의 인공 피부 흉터, 상처면에 다양 formah-에서 각질 세포 이식,이 작업시에. 이식은 이식 된 동종 이형 각화 세포가 흉터에 미치는 영향에 대한 형태 학적 데이터를 얻고 최적의 이식 변종을 결정하기 위해 수행되었습니다.

세 가지 이식 방법 모두 실제적이지만 기질이없는 IPAA의 이식은 IPAC가 손상 될 수있는 매우 힘든 절차이며 이식의 결과에 영향을 미칩니다. 또한, 이식 방법은 대형 표면의 작업을 제외합니다.

각질 세포 현탁액의 이식은 훨씬 경제적 인 방법이며, 긴 세포 배양을 필요로하지 않으며, 흉터의 크기에 상응하는 크기의 멸균 된 cambric billets를 사용하여 제안 된 버전에서 간단합니다. 상처 코팅에 대한 MIC와 비교하여 약 1 개월 동안 세포 현탁액을 이식하는 동안의 치료 효과의 지연은 여러 달 동안 계산 된 치료 기간의 중요한 순간이 아니다. 환자를 태우기 위해 IPC를 이식하는 동안 피부 구조 상태의 변화가 점진적으로 몇 년 동안 일어났다는 것이 알려져 있습니다. 상처 덮개에 keratinocyte 문화의 이식은 가장 편리하고 유망한 방법이지만, 그것은 또한 훨씬 더 비싸다. 또한, 오늘날에는 플라스틱, 흡습성, 정균 또는 살균 특성이 있어야하고 세포에 생물학적으로 중성 인보다 정교한 코팅을 요구합니다. 영화 "Polipor는"- 국내 영화 상처 범위의 중간 버전은 몇 가지 단점에도 불구하고, 상처에 실험적으로 각질 세포 이식 쥐를 연구하고이 방향 매력 흉터의 효과에 대한 결론을 도출하기 위해 우리를 허용했다.

화상 상처에 IPC 이식을 한 저자들은 위생 상처에 다층 각질 형성 세포층을 이식 한 후 첫 주 동안 표피가 두꺼워지고 계층화되었다고 지적했다. 표피의 모든 층은 잘 정의되어있다. 흥미롭게도 이식에서 세포층의 수가 피부 생검 표본에서보다 10-30 % 더 큽니다. 저자는 이미 3 일째 인 MPA, 기초 막 및 헤미 데모 솜의 이식 후 5 일째에 각질 세포 알갱이의 출현을 지적했다.

J.Rives et al. (L994), Paramonov BA (1996); NM 쿠즈 네 초프 et al. (1998)은 연소 후에 polnosloynymi 피부 결함 이식 BMD 환자는 다음의 초기 기간 동안에, 진피와 표피 사이의 통신이 매우 약하고 직선, 유두층가없는 것을 알았다. 두 번째 달이 끝날 무렵, 얕은 유두의 형성과 피부의 부속기가 시작되고, 진피와 표피 사이의 연결이 더 오래갑니다. 문헌 데이터는 화상 환자의 상처에 대한 동종 각질 세포의 이식에 대해 유망한 방법으로 이야기하고있다. 동종 이성 각화 세포의 거부가 10 일에서 3 개월까지의 기간 동안 다른 저자에 의해 일어 났음에도 불구하고 상처 표면을 치유하고 성장 인자를 분리하며 기계적으로 결함을 폐쇄하는 역할을 수행합니다. MPALK는 시험 관내 배양 중에 랑거 한 세포가 손실되어 수혜 생물에 오랫동안 존재할 수 있기 때문에 항원 활성이 감소 된 것으로 여겨진다. 또한 젊은 건강한 사람의 피부에서 얻은 동종 이식 문화는 외상 후 환자의자가 배양보다 비교할 수 없을 정도로 큰 생물학적 잠재력을 가지고 있습니다.

본 연구의 주요 목표는 동종 이성 각화 세포가 흉터에서 생존 할 수 있는지 여부와 그러한 생물학적 활성 "상처 코팅"의 영향을받는 흉터 조직의 변화가 무엇인지를 알아내는 것이 었습니다. 긍정적 인 결과가 나오면 재활 의학 분야에서 가장 효과적이고 노동 집약적 인 기술을 연구하십시오.

많은 점에서 우리에 의해 얻어진 데이터는 상처를 화상 화하기위한 동종 각질 세포의 전달 후에 인간 표피에서 발생하는 형태학적인 변화에 관한 문헌 데이터와 유사하다고 밝혀졌다. 그러나 이식 된 형태 학적 기질과 기술면에서 중요한 차이점이있다. 그래서. 기저막과 표피 연결 (hemidesmosomes, papillae)의 형성 과정은 흉터 변화가없는 상처 표면으로의 각화 세포 이식에서보다 나중에 일어난다. 이것은 진피 또는 근육 근막과 비교하여 반추위 조직의 영양 부족으로 인한 것 같습니다. 흉터, 특히 오래된 흉터는 매우 적은 수의 혈관이있는 조밀 한 결합 조직이며, 화상 상처의 바닥은 혈관이 풍부한 육아 조직입니다. 따라서, 각질 세포의 이식과 생식이 일어나는 조건은 완전히 다르다는 것이 명백하다. 세포의 이식 부위가 더 혈관 화되면할수록 쉽게 처리 할 수 있습니다. 이 가정에서 결합 조직이 여전히 느슨하고 혈관이 풍부한 어린 흉터를 다루는 것에 대한 선호도에 대한 결론이 있습니다.

이 실험 작업의 결과로 다음과 같이 증명됩니다.

1. MALK를 흉터에 이식하는 것이 가능합니다. 
2. 이식의 최적 방법은 상처 덮개에 각질 형성 세포를 이식하는 것입니다.
3. 흉터의 표면은 Schumann의 레이저 또는 커터를 사용하여 수술 적 피부 절개를 사용하여 연마해야합니다.
4. MPALK의 영향으로 반추위의 지표 표면이 급속히 상피화됩니다.
5. 더 혈관을 형성 한 흉터 조직, 즉 흉터가 젊을수록 각질 세포 이식 결과가 좋습니다.
6. 이식 된 각화 세포의 영향하에있는 흉터 조직은 점진적으로 변형되어 진피 모양 (피부의 부속기가있는 더 부서지는 상처 조직)으로 변합니다.
7. 흉터 조직의 점진적 완화는 표피층에서 시작됩니다. 혈관 형성을 개선합니다. 반추위 부위의 상부와 하부에있는 콜라겐 섬유는 세포가 이식되지 않은 흉터 조직보다 가볍습니다. 모낭과 피지선이 있습니다. 비대의 단계를 통과 한 후에, 그것의 구조에있는 표피는 정상 피부의 표피에 접근하고있다.
8. 관찰 된 변화는 흉터 조직의 탁월성을 향상시키고 굵은 섬유 조직으로부터 좀더 느슨한 조직으로의 전환을 촉진하여 흉터 유형의 개선을 유도하는 케라틴 틴 세포 - 유도 성장 인자, 사이토 카인과 관련된다.

따라서,이 연구에 기초하여, 다양한 형태의 흉터를 가진 환자의 재활을 위해 실제적으로 중요 할 수있는 흉터 조직에 이식 된 각화 세포의 유익한 효과가 결론 지어 질 수있다.

쥐에 대한이 연구는 또한 요구 사항을 공식화 할 수있었습니다. 각질 세포가 자라는 상처 덮개에.

상처 덮개는 다음과 같아야합니다.

• 세포와 생체 적합성,
• 통기성,
• 신축성있는 폼 빌딩베이스를 가지고있다.
• 친수성이있다.
• 의약 첨가제가 항균 약물을 함유하고 항산화 물질이 배양 세포에 독성이 없으므로

흉터의 생명 공학 치료의 임상 결과.

앞서, N. Carver et al. (1993)은 외과 용 드레싱이 각질 세포의 상처와 생존에 가장 적합하지만 층화 된 (성숙한) 표피 형성을 허용하지 않는다는 것을 발견했다. 층화 표피를 형성하기 위해서는 대기 환경이 필요합니다. 그러므로, 다층 층을 부착 한 후에, 건조 붕대 또는 수용성 연고 하에서 창상을 제거하고 수행하기 위해 폐쇄 된 상처 덮개가 7-10 후에 제안되었다. 우리는 세포가 성장하는 "기질"의 품질과 성질이 세포 물질의 이식 효과, 결과적으로 의사의 결과에 매우 중요하다고 말할 수 있습니다. 그러나 제안 된 옵션 (인공 가죽, 카르복시 메틸 셀룰로오스의 부직포, 피브린 코팅제, 반투성 폴리 우레탄 필름)이 풍부하지만 오늘날에도 이상적인 상처는 없습니다. 이 문제에서 중요하지 않은 순간은 높은 비용으로 생명 공학 치료의 총 비용이 증가하기 때문에 "기질"(특수 상처 코팅)의 비용입니다.

세포 기술의 유효성은 지금까지 입증 된 바 있지만 불행히도 이러한 기술은 매우 비싸다. 특히 세포 배양액의 산업적 생산이 확립되지 않은 국가에서는 이러한 기술이 매우 비싸다. 그럼에도 불구하고, 미국과 같은 국가들은 오래 전부터 화상의 이식을위한 세포질 생산을위한 산업을 확립 해왔다. 특히,이 회사 BioSurface 기술 Inc는 1989 년부터, 1cm와 세계 (R.Odessey, 1992)의 주위에 79 개국에서 240 명의 환자의 치료에 사용되어왔다 각질, 37,000 적층 층 제기 ² 세포 배양을 7-8 광고비 $ US.

다양한 질병과 피부 문제를 치료하는 기술에는 많은 차이가 있지만, 세포 치료의 핵심은 우수한 세포 물질의 생산과 이식입니다.

이 프로세스는 다음 단계로 구성됩니다.

• 영향을받는 (또는 기증자로부터) 피부를 선택하고,
• 생물 공학 센터로의 피부 플랩 운송,
• 기저층의 세포 분리와 그 증식,
• keratinocytes (IPC)의 다층 층의 형성.
• 세포 배양의 이식.

다층 각질 형성 세포층의 이식 치료의 주요 문제점은 세포 이식의 모든 단계에서 생존 가능한 세포의 필요성이다. 자가 또는 동종 세포를 분리하기위한 피부 조각은 가능한 한 얇아야한다. 왜냐하면이 경우 기계적 및 효소 적 방법을 사용하여 쉽게 분리 할 수 있고 성장을위한 살아있는 세포의 현탁액을 얻을 수 있기 때문이다. 그들은 dermatome을 잘라내거나 눈꺼풀의 피부, 포피, 어깨의 내면을 사용하여 얻을 수 있습니다. 세포가 할로겐 (염소, 요오드), 과산화수소에 민감하므로 물질을 복용 할 때 피부의 치료에 사용할 수 없습니다.

피부 이식편으로부터의 세포의 정량적 및 질적 수율 및 배양의 효율성은 또한 기증자의 건강 상태 및 나이에 의존한다. 또한 피부 생검 시험편은 가능한 한 빨리 공인 된 공인 시험소에 적절한 조건 (환경, 온도)으로 실험실로 전달되어야합니다.

10 % 소 혈청, 5 % 태아 소 혈청 및 항생제가 첨가 된 DMEM 배지를 첨가 한 Eagle의 배지 또는 배지 199는 피부 플랩을 저장하고 운반하는데 사용될 수있다.

세포학 실험실에서 피부 생검은 먼저 기계적으로 작은 조각으로 나뉘어지고, 그 다음 피부 단편의 가공은 효소 (trypsin, collagenase, dyspase 등)의 도움으로 수행됩니다.

효소의 작용하에, desmosomes에 의한 파괴가 일어나고 keratinocytes는 분리 된 세포 또는 다른 수의 세포로 구성된 응집체로서 배지로 방출됩니다. 배양 물의 경우, 5 % CO를 함유 한 배양기, 페트리 접시 또는 t = 37 ℃의 바이알에서 특별한 배지에서 배양 한 기저 각질 세포만을 사용한다. 48 시간 이내에 keratinocyte 콜로니 형성이 관찰되며 점진적으로 단일 층으로 수렴된다. 충분한 수의 세포를 얻은 후, 생성 된 현탁액을 이러한 목적으로 제조 된 상처 커버 상에 펼치고 페트리 접시에 위치시킨다. 현탁액으로부터, 먼저 단일 층 및이어서 다층 층의 각화 세포가 형성된다. 개략적으로, keratinocyte 재배 과정의 단계는 그림에 표시됩니다. 12 (33.43.54.65).

이식에 적합한 다층 각화 세포 형성의 형성은 보통 7-10 일이 걸린다. 때때로이 기간은 원본 자료의 품질 (나이, 기증자 건강, 자료의 정확성, 사용 된 매체의 품질 등)에 따라 더 길어지는 경우도 있습니다. 다층 층이 자라면 세포 표면에 이식에 적합하지 않은 세포 사멸 현상이있는 세포가있을 수 있습니다. 배양 된 각질 세포 (IPC)의 다층 층에 의해 상처 피복물이 성장한 페트리 접시는 + 15 ℃ 이상의 온도에서 특별한 용기로 병원에 배달됩니다.

IPC 성장을위한 Green의 수정 된 방법

우리가 상처 코팅으로 일할 때, 우리는 쥐를 대상으로 한 실험에서 시작한 폴립 사진 필름을 버리고 다층 cambric을 사용했습니다. 따라서 다층 각화 세포 지층은 비록 최적의 상처 덮음이 아니지만 prefat과 sterile batiste에서 우리에 의해 재배되었다.

조약 및 정보에 입각 한 동의서 서명 : 필요한 윤리적 규범을 준수하는 자원 봉사자에 대한 임상 연구가 수행되었습니다.

1. 자체 (자가) 및 은행 세포 (동종) 각질 형성 세포로부터 얻은 배양 물이 적용되었다.
2. 자신의 각질 형성 세포는 환자의 어깨 안쪽에서 자른 피부 조각에서 얻어졌습니다.
3. 흉터의 박피술은 열전쌍, 회전 디스크 및 에르븀 레이저로 수행되었습니다.
4. 정상 영양, 저 영양 및 비대성 흉터를 가진 환자 그룹이 채취되었습니다.

피부 흉터 유형을 개선하기위한 세포 기술 적용의 기술적 프로세스는 다음 단계로 구성됩니다.

1. 환자 선정.
2. 치료의 본질, 기대되는 결과를 얻는시기, 조약의 서명 및 정보에 입각 한 동의를 설명하십시오.
3. 수술 전 2 ~ 3 주 동안 환자를 1 명씩 셀 임. 하루에 3 번, 1t에 징크 런. 하루에 3 번.
4. 어깨의 내면에서 길이 2.0cm, 너비 0.7-1.0cm의 피부 조각을 취하여 겨드랑이 부분의 거의 하단에 위치하여자가 각질 세포를 얻습니다.
5. 환자가 어깨의 내 표면에 선형 상처를 입을 가능성으로 자신의 각질 형성 세포를 분리하는 것을 거부하는 경우, 세포 물질을 세포 은행 (allogenic keratinocytes)에서 채취했습니다.
6. 각질 형성 세포는이 유형의 작업에 대해 공인 된 실험실 조건에서 분리되고 재배되었습니다.
7. 이식하기에 충분한 IPC를받은 후, 외과 수술의 날을 병원의 흉터에 투여 한 후, 페트리 접시의 특수 용기에 재료를 넣었다.
8. 반추위의 박피술, 지혈을 시행하고, 지표면을 멸균 생리 식염수로 씻고 건조한 후 IPC를 멸균 된 batiste "세포를 아래로"이식했다. 즉, MIC에서 상층에있는 세포는 연마 된 표면에 인접하여 더 낮았다.
9. 무균 필름을 겹쳐서 탄력있는 붕대 또는 Omnifix 탄력있는 반창고로 피부에 고정 시켰습니다. 필름 대신 실리콘을 함유 한 무관 심한 코팅제, 예를 들어 Mepitel, Mepiform, 실리콘 젤 플레이트를 사용할 수도 있습니다.

5-7 일 후에 필름 또는 실리콘 코팅이 제거됩니다. 이 시간까지 모든 각화 세포는 연마 된 흉터에 기어 들어가 표면에 부착해야합니다.

10. 필름 및 실리콘 코팅 아래에 생성 된 습한 환경은이 문제에 적극적으로 기여합니다. 이 시점에서 흉터에 남아있는 침례교 인은 키 리오스 또는 키토산 겔을 함침시킬 수 있습니다. 결과적으로 2 일째에는 환자의 편의를 위해 옴니 픽스 (Omnifix)와 같이 탄력 있고 통기성이 좋은 석고로 고정하는 것이 더 낫습니다. 통기성 껍질은 새로 형성된 표피가 차별화되어 성숙한 것으로 변하게합니다.

흉터의 유형과 연삭 깊이에 따라 드레싱은 8-10 일 후에 거부됩니다. 이시기의 표피는 정상 피부보다 세포층이 30-40 % 더 많습니다. 기초 막은 형성되지 않습니다. 두꺼워 진 표피의 각화 세포는 생물학적으로 활성 인 분자를 흉터 조직으로 방출합니다.

생명 공학 치료의 성공은 주로 수술 후 치료 방법에 달려 있습니다. 세포 배양은 "부드러운"종류의 상처 덮개이며 이식 후 초기에는 골밀도가 하부 조직에서 쉽게 분리 될 수 있습니다. 따라서 환자는 수술 후 흉터를 관리하는 것이 좋습니다. 8-9 개월 동안 냉찜질을 문지르지 말고 쉽게 닦아서 얇은 새로 만든 표피를 벗겨내는 것을 피하십시오.이 표피는 아래 조직과 꼭 맞지 않습니다.

참고 :

수술 전 및 할로겐화 산화 방지제 및 보존제 (yodopiron, sulyodopiron, iodinol, yodinat, 클로르헥시딘, 과산화수소)의 박피를 사용하는 동안 절대적 그들의 세포 독성 효과에 기인 금기 kletok- 이식 전에 허용된다. 세포 독성 또한 메틸렌 블루입니다. 화려한 녹색.

특히 비대성 흉터로 작업 할 때 감염을 피하기 위해 neomycin sulfate, polymyxin 또는 gentamicin으로 수술장을 치료할 수 있습니다. 그들은 케 라티노 사이트에 세포 독성 효과를 발휘하지 않습니다.

이 치료의 결과로 삼중 효과가 달성됩니다.

1. 반추위의 표면 정렬.
2. 새로운 표피, 정상 두께의 위에 레이어를 만듭니다.
3. 사이토 카인, 성장 인자 및 기타 생물학적 활성 분자의 작용으로 흉터 조직이 유피와 유사하게 변형되어 이식 된 세포에 의해 분비되고 케라틴 세포, 섬유 아세포 및 대 식세포에 의해 자극 됨.

흉터가 덜 눈에 띄게되고, 더 탄력 있고, 모공이 퍼지고, 퍼프 모발이되며, MPC에있는 멜라닌 세포의 존재로 인해 색소 침착이 회복 될 수 있습니다.

그러나이 모든 긍정적 인 순간들은 즉시 나타나지 않습니다. 이와 관련하여 환자에게 경고해야합니다. 흉터 조직이 진피로 변형되는 과정이 느리고 이러한 치료의 최적 결과는 10-14 개월 이전에 기대 될 수 없다는 사실이 밝혀졌습니다. 드레싱이 거부 된 직후 연마 된 표면은 뚜렷한 다색성을 가지며 연마 공정이 더 밝아집니다. 에르븀 레이저로 정상 흉터를 연삭 할 때 피부 손상이 가장 적습니다. 흉터 및 주변 피부의 색은 3 주에서 8 주 사이에 회복되었습니다. 이러한주의 사항에도 불구하고, 때로는 몇 달 동안 독립적으로 진행될 수있는 수술 후 과다 색소 침착이 있습니다.

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