간엽 줄기 세포

국소 줄기 세포 중 중간 엽 줄기 세포 (mesenchymal stem cells, MSCs)는 인체의 모든 기관과 조직의 기질 (stromal) 매트릭스를 구성하는 특별한 장소를 차지합니다. MSC 연구의 우선 순위는 러시아 생물 과학의 대표자들에 속한다.

지난 세기 중반, 다 능성 간질 성 골수 줄기 세포의 균질 한 배양이 A. Friedenshtein의 실험실에서 처음으로 분리되었습니다. 오랜 시간 동안, 기판에 부착 된 중간 엽 줄기 세포가 더 식세포 활성을 갖지 않는 섬유 아세포 클론 형성된 기판 상에 낮은 고정 후 파종 밀도에서 높은 증식률 및 배양을 유지. MSC 증식의 중지는 뼈, 지방, 연골, 근육 또는 결합 조직 세포로의 자발적인 시험 관내 분화로 종료되었습니다. 더 많은 연구에 의해 다양한 포유 동물 종의 골수 간질의 섬유 모세포 유사 세포의 골 형성 가능성 및 이들의 콜로니 형성 활성을 확립 할 수있게되었다. 생체 내 실험에서, 콜로니 형성 섬유 모세포 유사 세포의 이형 및 동종 이식은 뼈, 연골, 섬유질 및 지방 조직의 형성에 의해 완료되는 것으로 나타났다. 골수 줄기 세포는 단일 세포주 내에서자가 재생 및 다양한 분화를위한 높은 용량을 가지고 있기 때문에 다 능성 중간 엽 전구 세포라고 불립니다.

중간 엽 줄기 세포에 대한 45 년간의 근본적인 연구를 위해 임상 실습에서 파생 상품을 사용하기위한 실제 조건이 만들어 졌음에 유의해야합니다.

오늘날 인체의 모든 조직은 증식, 이동, 분화 및 성숙 과정의 결과로 다른 세포주의 줄기 세포에서 형성된다는 것은 의심의 여지가 없습니다. 그러나 최근에는 성인 신체의 줄기 세포가 조직 특이 적이기 때문에 그들이 위치한 조직의 전문화 된 세포주 만 생산할 수 있다고 믿어졌습니다. 이 개념적 상황은 말초 혈액의 세포 요소뿐만 아니라 타원형 간세포로 조혈 줄기 세포가 변형된다는 사실에 의해 논박되었다. 또한, 신경줄 기세포는 조혈 전구 세포의 조기 확립 된 계통뿐만 아니라 뉴런 및 신경 교세포 요소를 생성시킬 수 있었다. 이어서 간엽 줄기 세포는 골격, 연골 및 지방 조직의 세포 요소를 생성하여 신경줄 기세포로 변형 될 수 있습니다. 성장 과정에서 생리 학적 및 재생산 적 조직 재생 과정에서 조직 특이성 줄기 보호 구역에서 유보되지 않은 전구 세포가 생성된다고 가정합니다. 예를 들어 근육 조직 수리는 골수에서 골격근으로 이동하는 중간 엽 줄기 세포를 통해 실현 될 수 있습니다.

크로스 호환성 줄기 세포는 모든 연구자를 인식하지만 세포 이식 및 유전 정보의 세포 벡터 소스로 중간 엽 줄기 세포의 임상 사용의 가능성을 분리하는 것이 상대적으로 용이하고 전파 할 수 있습니다 능성 기질 골수 줄기 세포로 이의를 제기하지 않은 체외 배양. 과학 문헌에서 동시에 골수 기질의 만능 줄기 세포의 잠재력에 대한 보고서를 표시하고 있습니다. 중간 엽 줄기 세포의 분화의 특정 유도의 영향을 받아 신경 세포, 심근 세포 및 간세포로 변환 증거되게 연구 프로토콜로서. 그러나 일부 과학자 기회 심각한 의심이 초기 배 발생 동안 재 활성화 및 유전자 발현에. 동시에, 모든 사람들이 조건이 재생 의학 및 플라스틱는 ESC의 만능 줄기 세포로 분화능 중간 엽 줄기 세포를 확장 발견 될 경우 자동으로 윤리적, 도덕적, 종교적, 법적 성격의 많은 문제를 해결할 것을 잘 알고 있습니다. 이 경우 환자의 줄기 재생 능력의 근원자가 간질 세포이기 때문에 또한 해결 세포 이식 면역 거절의 문제이다. 이 잠재 고객이 얼마나 진짜인지, 가까운 장래에 나타날 것입니다.

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중간 엽 줄기 세포의 의약 용도

중간 엽 줄기 세포의 유도체의 임상 사용은 주로 피부 넓고 깊은 열 병변 조직에 의한 결함의 감소와 관련된다. 깊은 화상의 치료를위한 동종 섬유 아세포와 같은 중간 엽 줄기 세포의 적합성의 전임상 실험 평가를 실시했다. 섬유 아세포와 같은 골수 중간 엽 줄기 세포가 가능 깊은 화상 상처의 재생을 최적화하기 위해 그들에게 이식하게 문화의 단층을 형성하는 것을 알 수있다. 저자는 유사한 특성 배아 섬유 아세포를 가지고 있습니다 만, 후자의 임상 응용 프로그램은 기존의 윤리적, 법적 문제로 제한됩니다. Wistar 쥐에서 피부의 모든 층에 손상을 입힌 깊은 열 화상이 모델링되었습니다. 화상 면적은 피부 총 표면의 18-20 %입니다. 첫 번째 실험 그룹에서 깊은 열 손상 및 동종 섬유 아세포 유래 중간 엽 줄기 세포의 이식 쥐 구성되어있다. 두 번째 그룹은 깊은 열 화상과 동종 배아 섬유 아 세포의 트랜스 - 농장과 동물들로 구성되었다. 세 번째 그룹은 세포 치료를하지 않는 열 화상이 심한 대조군 쥐에 의해 나타났다. 섬유 아세포 유래 중간 엽 줄기 세포와 배아 섬유 아세포 현탁액을 2 × 10의 양 피펫 화상 상처 표면에 도포 된 ⁴ 화상 모델링과 가피 형성 괴사 절제술 후 2 일째에 세포. 이식 후, 세포들은 젠타 마이신과 등장 성 염화나트륨 용액에 적신 거즈로 피복면을 굽기. 울타리 골수 세포는 대퇴골에서 성인의 Wistar 쥐에서 생산 된 중간 엽 줄기 세포의 섬유 아세포 라인의 후속 유도로 중간 엽 줄기 세포를 얻을 수있다. 배아 섬유 아세포는 14-17 일 된 태아의 폐로부터 얻어졌다. 배아 섬유 아세포와 골수 세포를 미리 엽 줄기 세포가 95 %의 습도에서 5 % CO2로 분위기에서는, C02의 iikubatore 37 ° C에서 배양 접시에서 배양 하였다 얻었다. 단층 형성을 위해 MSC (14) 17 일에서 요구되는 반면, 배아 섬유 아세포는 4-6 일 동안 배양한다. 다음의 중간 엽 줄기 세포는 4 일 동안 해동 및 중간 엽 줄기 세포 배양에 의해 제조 된 섬유 아세포 유래 중간 엽 줄기 세포에 대한 출발 물질로하여 동결 유지 하였다. 섬유 아세포에서 생성 된 중간 엽 줄기 세포의 수는 같은 문화 기간 동안 발생하는 배아 섬유 아세포의 3 배 이상 숫자입니다. Transtslantirovannyh 세포들의 게놈은 재조합 아데노 바이러스의 V 형 캐리어 1AS-2를 코딩하는 유전자 ß 갈 락토 대장균에 기초 바이러스 셔틀 벡터를 이용하여 표지 된 배양 단계에서 상처를 레코딩의 동정을 행 하였다. 다양한 시간에서 살아있는 세포는 이식 후 특성 블루 그린 색을주는 부가 기판 X 갤런와 저온부에서 면역 검출. 시각 동적, 면적 측정 및 화상 상처의 조직 학적 평가 조건의 결과로, 심지어는 격리 된 그룹에서 세포의 이식 후 3 일에서 과정을 상처 치유 동안 유의 한 차이를 표시 한 것으로 밝혀졌습니다. 특히이 차이는 세포 이식 후 7 일째에 나타났습니다. 섬유 아세포 등 중간 엽 줄기 세포를 이식 제 그룹의 동물은 상처가 상당히 소형화되어 육아 조직은 표피의 수준으로 전체 영역에 걸쳐 성장 균일 장밋빛 강렬한 색을 취득하고, 표면 레코딩. 몇몇 상처 표면에 얇은 콜라겐 막을 형성하지만, 그녀는 화상의 전체 영역을 덮도록 계속 하였다. 배아 섬유 아 세포를 이식 두 번째 그룹의 동물, 육아 조직은 상처 가장자리의 표피의 수준으로 해제되어 있지만, 일부 장소에서, 상처에서 동시에 plazmoreya에 1 군에 비해 더 강렬했고, 초기에 형성된 콜라겐 필름은 거의 사라졌다. 7 일 화상 상처에, 줄기 세포 치료를받지 않은 동물에서 피브린으로 코팅 옅은 움푹, 괴사 조직이었다. Plasmorrhea는 화상 표면을 통하여 알려졌다. 조직 학적으로, 제 1 및 제 2 그룹의 동물 세포의 침윤 및 혈관의 발전의 감소를 보여, 초기 재생기 프로세스의 이러한 징후는 그룹 1의 쥐에서 더 심각왔다. 대조군에서 결석 새로 형성된 혈관의 조직 학적 패턴을 세포 상처 침투의 흔적을 보여 주었다. 관찰 15 ~ 30 일 하루 1 그룹 화상 면적의 동물은 다른 그룹의 쥐보다 훨씬 작았 및 과립의 표면은 더 개발되었다. 2 그룹 화상 면적의 동물도 한계 상피 때문 쥐의 컨트롤 그룹에서 화상 상처의 크기에 비해 감소된다. 컨트롤의 그룹 화상 표면 사이트는 섬이 섬유소 플라크가 연소 표면을 가로 질러 중간 plazmoreya을 계속했다, 거미 정맥 그 위에 나타나는 드문 남아 있었다 어려운 분리 딱지 무언가를 연한 과립 남아 있었다. 일반적으로, 제 3 그룹의 동물은 상처의 크기를 줄일 수 있지만, 상처 가장자리 podrytymi 남아 있었다.

따라서, 세포 요법의 사용은 섬유 아세포 - 유래 간엽 줄기 세포 및 배아 섬유 모세포 이식의 결과로 화상면의 치유의 가속을 표시 섬유 아세포 - 유래 간엽 줄기 세포 및 태아 섬유 아세포를 이용하여 상처 치유 비율의 비교 연구시, 그리고없이. 그러나 속도를 치유 섬유 아세포의 상처 동종 중간 엽 줄기 세포를 사용하는 경우 배아 섬유 아 세포의 이식에 비해 높았다. 이 프로세스의 재생 상 변화 촉진에 적하 하였다 - 침윤 세포주기를 줄이기 위해, 네트워크의 혈관 증식의 속도뿐만 아니라, 육아 조직의 형성을 증가시킨다.

동적 인 계측의 결과는 화상 상처의 자발적 치유율이 (세포 요법을 사용하지 않고) 가장 낮았다는 것을 나타냅니다. 속도를 치유 섬유 아세포의 상처 동종 중간 엽 줄기 세포의 이식 후 15 일 및 30 일에 배아 섬유 아 세포의 이식에 비해 높았다. 베타 - 갈 락토시다의 검출을위한 조직 화학적 방법은 섬유 아세포와 같은 중간 엽 줄기 세포와 표면의 관찰의 전체 기간 동안 배아 섬유 아세포과 깊은 재생 상처 이식 세포의 이식 후 생존 남아있는 것으로 나타났다. 저자는 화상 상처의 재생의 높은 비율이 생리 활성 요인 rostostimuliruyushih 성숙하는 동안 이러한 세포의 섬유 아세포 조절 방출의 중간 엽 줄기 세포를 사용하는 것이 좋습니다.

화상 상처의 치료를위한자가 또는 동종 각질 세포와 동종 섬유 아 세포의 이식 및 클리닉에 사용됩니다. 광범위한 깊은 화상 어린이의 수술 적 치료가 주입 미디어를 사용하는 다른 반응에 의한 외상 및 수술 개입, 상당한 혈액 손실의 높은 다양성에 복잡한 작업입니다 주목해야한다. 광범위한 깊은 화상으로 피부와 성형 수술의 구현에 가장 큰 어려움이 지역은 때문에 그녀의 상태의 심각성 및 기증자 피부의 자원의 부족으로 신체 표면의 40 %를 초과. 큰 천공 비율 메쉬 이식의 사용은 epiteliziruyutsya 세포 천공 후 이미지가 매우 느린이기 때문에, 문제를 해결하고, 종종 피부 이식이 용해 또는 건조하지 않습니다. 이러한 코팅은 ksenokozha 등의 상처, 사체 동종 이식을 구울, 합성 필름 코팅은 항상 충분히 효과적이지 않다, 이렇게 배양 된 각질 세포와 섬유 아세포의 화상 표면 층의 폐쇄를위한 새로운 방법의 개발. 특히, 이식 동안 배양 제공 allofibroblastov를 사용하여 화상면을 폐쇄하는 방법은 화상의 테두리 부상에 보존 증식 epidermotsitov에 자극 효과가 두드러 및 각질 세포의 이식은 웨브를 메쉬. Budkevich L. 동부 등 (2000)에 화상 어린이의 치료를 위해이 방법을 적용한 결과를 나타낸다. 1 세에서 14 세 사이의 열에 의한 외상을 입은 31 명의 소아가 관찰되었다. 세 아이 총면적에 상처 IIIA-B 레코딩 - 신체 표면의 71-85 % - 심지어 세에서 50-70 % - IV도가 40 %, 25이었다. 조기 수술 necrectomy 배양 allofibroblastov 및 autodermaplasty의 이식과 함께. 제 1 단계 처리에서, 제 괴사 조직 절제술을 수행 하였다 - 배양 allofibroblastov 캐리어 필름의 이식에서 (배양 allofibroblastov 이식 48 시간 후) 제 - 1 autodermoplasty 천공 비율 매트릭스 피부 플랩 제거 4. 심한 화상 질환으로 병원에 입원 3 명 명의 환자, 배양 allofibroblasty 상처를 과립 화에 이식했다. 배양 allofibroblastov의 이식을 두 번, 18 개 어린이에 한 번 수행 - 11, 3-2 환자. 세포 배양에 의해 덮인 상처 표면의 면적은 30 내지 3500 cm2였다. 피부 플랩, 화상의 치유와 사망자 수 심한 열 손상의 시간의 생착의 총 비율에 의해 평가 배양 allofibroblastov의 효능. 이식의 생착은 86 %의 환자에서 완료되었습니다. 14 %의 경우에 부분적으로 피부 플랩이 나타나지 않았다. 진행중인 치료에도 불구하고, 6 명 (19.3 %)의 어린이가 사망했습니다. 전체 피부 병변 면적은 신체 표면의 40 ~ 70 %였습니다. 배양 allofibroblastov의 이식은 화상 부상 한 환자의 사망과는 관계가 없었다.

삼년까지 - - 치료의 결과를 분석, 저자는 호환되지 않는 생활 이전의 화상은, 어린이의 신체 표면 (의 35-40%의 피부 영역의 깊은 열 손상을 치료하는 데 있습니다 30 %의 면적 중요한 깊은 화상은 청소년을위한입니다 나이 - 신체 표면의 40 % 이상). 배양 necrectomy의 allofibroblastov의 autodermaplasty 이후 피부의 외과 이식이 큰 화상, 천공 인자 IIIB와 접목하면 - IV 정도는 중요한 남아 있지만 지금 심지어 피해자의 생명을 구하기 위해 많은 경우에 전망이있다. 깊은 화상 어린이 배양 allofibroblastov 및 autodermaplasty의 이식과 함께 수술 necrectomy 기증자 사이트의 적자로 피부의 고급 병변이있는 환자에서 특히 효과적인 것으로 입증되었다. 활성 수술 전술 및 이식 배양 allofibroblastov는 생착을위한 유리한 조건을 만들어 이런 환자, 화상 질환의 감염성 합병증의 수의 감소의 전신 상태의 빠른 안정화를 촉진 광범위한 화상 환자에서 사망의 발생률을 감소, 병원 치료의 잃어버린 피부와 기간을 복원하는 시간을 줄일 수 있습니다. 따라서, 배양 allofibroblastov의 이식 autodermaplasty 피부 플랩 이전에 운명 간주되었다 심한 화상, 어린이 회복을 달성 하였다.

화상 질환을 치료하는 주된 목적은 손상된 피부의 완전하고 신속한 회복을 최대화하여 이로 인한 독성 영향, 전염성 합병증 및 신체 탈수를 예방하는 것입니다. 배양 된 세포의 적용 결과는 대체로 화상 상처 자체의 이식 준비에 달려있다. 배양 된 각화 세포를 이식하는 경우 외과 적 절제술 후 상처 표면에서 이식 된 세포의 55 % (면적 기준)가 생존하는 반면, 생식기에서는 이식율이 15 %로 감소합니다. 그러므로 광범위하고 심한 피부 화상을 성공적으로 치료하려면 적극적인 외과 전술이 필요합니다. 화상 상처 IIIB-IV 학위가있는 경우, 중독의 영향을 줄이고 화상 질환의 합병증의 수를 줄이기 위해 화상 표면이 괴사 조직에서 즉시 방출됩니다. 그러한 전술을 사용하는 것은 화상을 입은 순간부터 병원에서의 화상이 심한 환자의 체류 기간과 상처를 막는 데 걸리는 시간을 줄이고 사망자 수를 현저하게 줄이기위한 열쇠입니다.

지난 세기의 80 년대 초반에 화상 표면을 덮기 위해 배양 된 각화 세포의 성공적인 사용에 관한 첫 번째 보고서가 나타났습니다. 결과적으로,이 조작은 배양 된 각질 형성 세포 층을 사용하여 이루어졌으며자가 조직에서 가장 많이 얻어졌으며 allokeratinocytes에서는 훨씬 적었다. 그러나, autokeratinocytoplasty의 기술은 keratinocytes에서 충분한 이식편을 생산하는 데 필요한 시간이 크고 3-4 주 정도의 금액 동안 세포 은행의 생성을 허용하지 않습니다. 이 기간 동안 화상 및 기타 합병증을 일으킬 위험이 급격히 증가하여 병원 환자의 총 체류 기간이 크게 연장됩니다. 또한 육화성 화상 상처에 이식 할 때 autokeratinocytes는 실제로 생존하지 못하며 특별한 성장 배지 및 생물학적 활성 각화 세포 증식제의 높은 비용으로 인해 임상 적용이 크게 제한됩니다. 콜라겐 형성술, 저온 보존 체외 이식술 및 다양한 생체 고분자 코팅제의 사용과 같은 기타 생명 공학 기술은 심한 화상은 물론 광범위한 표면 치료의 효과를 높입니다. 배양 된 섬유 아세포로 상처 표면을 코팅하는 방법은 배양 된 세포 풀의 주성분이 각화 세포가 아니라 섬유 아세포 인 점에서 근본적으로 상이하다.

방법의 개발을위한 전제 조건은 작은 혈관을 둘러싸고있는 혈관 주위 세포로 인해 각질 세포의 증식과 접착에 강한 자극 효과에 많은 성장 인자를 생산하고 상처 치유를 제공하는 섬유 아세포로 변환 할 수 프로 genitornymi의 중간 엽 세포가 있다는 증거로 봉사했다. 배양 된 섬유 모세포를 사용하여 상처 표면을 닫은 즉시 배양 된 각화 세포의 사용과 비교하여이 방법의 많은 장점이 있음을 밝혀냈다. 특히, 문화의 섬유 아 세포의 준비는 10 배 이상 각질 세포를 얻는 비용을 이식의 비용을 절감 특별한 문화 미디어와 성장 촉진제의 사용을 필요로하지 않습니다. 섬유 아세포는 쉽게 부분적으로 차례로이 가능 세포의 동종 이식의 제조에 사용하고 자신의 은행을 만들 수 있습니다 자신의 표면 조직 적합성 항원을 잃게하는 동안 계대,을 실시한다. 시간은 3 주 (keratinocytes)에서 1-2 일 (섬유 아 세포에 대한)에서 클리닉에서 사용하기 위해 준비된 이식편을 얻는 데는 짧습니다. 섬유 아세포의 차 배양 인간 섬유 아세포의 영수증에 autodermoplasty 계대 배양 세포 파종 밀도에서 찍은 단편 피부에서 세포를 배양함으로써 얻을 수 것은 20 × 10 ³ 1cm 당 ².

콜라겐 타입 I 및 III 인간 섬유 아세포와 공동 배양 피브로넥틴 기판 상에 각질 세포 증식의 섬유 아세포의 효과 및 증식 이들 조절 단백질과 분화 각화 세포의 특성을 비교 분석 및 형태를 연구. 인간 각질 형성 세포는자가 피부 성형 수술 중 찍은 화상 환자의 피부 단편으로부터 분리되었다. 각질 형성 세포의 밀도는 cm2 당 50 x 103 세포였다. 배양 된 섬유 아세포의 이식의 임상 효능을 517 명의 환자에서 평가 하였다. 모든 환자는 두 그룹으로 나뉘어져 있었다 : 1 차 - 화상 IIA, B-IV 학위를받은 성인; 둘째 - IIIB - IV 급 심부름 화상. 글리코 사 미노 글리 칸, 피브로넥틴, 콜라겐의 재생 과정에서의 역할과 관련하여 섬유 아 세포의 단층 문화의 구조적 및 기능적 조직의 역학의 평가, 그리고 저자가 이식의 생산을위한 섬유 아세포 문화를 사용하는 가장 유리한 조건으로 셋째 날을 결정하는 것을 허용했다. 섬유 모세포 증식 및 각화 세포의 분화에 미치는 영향을 조사했다 그 시험관 아세포 주로 각질 세포 접착 공정에 뚜렷한 자극 효과, 부착 세포의 수와 2 회 이상 고정 속도 증가가 아래. 접착 과정의 자극은 DNA 합성의 강도와 각화 세포의 증식 수준의 증가를 동반합니다. 또한, 섬유 아세포 및 이들에 의해 형성된 외 매트릭스의 존재는 각질 세포 분화 및 기저막 형성 궁극적 장치 각질 세포 간 연결 tonofibrillyarnogo 형성에 필수 인 것을 발견 하였다. 깊은 화상 아동의 치료에 특히 적자 피부 공여부의 광범위한 병변이있는 환자에서 이식 allofibroblastov 문화의 임상 효능을 설립했다. 복합 morfofunktcionalnoe 연구 보였다 그 그래프트 특징으로 섬유 아세포의 세포 외 기질 세포에서 생성되는 활성 DNA 합성뿐만 아니라 콜라겐, 피브로넥틴 및 글리코 사 미노 글리 칸. 저자는 10 ((96 %까지) 이식 섬유 아 세포의 생착의 높은 비율 (각질 세포의 경우 2~3시간 대신 24 ~ 48 주 이내) 그 준비의 측면에서 급격한 감소, 연소 표면의 상피의 상당한 가속, 가격에 상당한 감소를 제안 시간)에 이식을 케라틴 세포 이식과 비교하여 섬유 아세포로부터 성장시키는 기술을 개발 하였다. 이전의 삶과 호환되지 않는 것으로 생각되었다 신체 표면의 50 % 이상 열 손상 - 배양 allofibroblastov의 이식의 사용은 가능한 중요한 화상 어린이의 생명을 구할 수 있습니다. 배아 섬유 아 세포의 동종 이식도 설득력 다양한도 화상 및 면적 상처와 회복기 환자의보다 신속한 재생뿐만 아니라 사망률의 상당한 감소뿐만 아니라 입증 있음을 주목할 필요가있다.

자가 섬유 아세포는 대체 보정 손상 성대와 같은 복잡하고 성형 수술에 사용됩니다. 일반적으로 이러한 목적으로 소 콜라겐의 면역 원성에 의해 제한 조치의 기간에 사용. 외국 단백질, 소 콜라겐, 콜라겐받는 사람에게 민감한 콜라겐 준비의 기술이 개발 된 위험을 줄이기 위해, 면역 반응을 일으키는 원인이 될 수있다, 글루 타르 알데하이드로 가교. 이들 장점은 큰 안정성과 결함 성대 위축의 제거에 실제 적용을 발견 하였다 낮은 면역 원성이다. 자가 콜라겐의 주사는 1995 년에 처음 사용되었습니다. 방법은 효소 촉매 된 가교 분자를 포함한자가 콜라겐 섬유의 기본 구조의 보존을 제공 하였다. 콜라겐 섬유는 상기 절단 재구성 콜라겐 telopeptides보다 프로테아제에 의해 분해에 더욱 내성이 있다는 사실. 무결성 콜라겐 섬유의 급 구조와 인접 콜라겐 분자 사이의 가교 결합에 중요한 telopeptides. 소 콜라겐 제제와는 달리, 콜라겐자가 수신자에 대한 면역 반응을 유발하지 않지만, 제 채우고으로 충분히 효과적이지 않다. 영구 보정 의한 섬유 아세포의 콜라겐의자가 이식 지방 생산을 달성 할 수있다. 그러나 병원에서자가 섬유 아세포 이식의 효과에 대한 조사는 약간의 어려움을 밝혔다. 소 콜라겐의 투여 이후에 비하여 섬유 모세포 이식의 임상 효과 후 이른시기에 약하다. 배양 된자가 섬유 아세포의 이상이 정상 섬유 아세포의 변화의 가능성을 배제 할 수없는 경우로 인해 섬유 아세포의 콜라겐 원 섬유의 특정한 상호 작용, 콜라겐 겔의 감소에 의해 입증 섬유증 및 흉터의 개발을 담당 소위 근섬유,. 또한, 일련 계대 후 시험관 내에서 섬유 아세포는 세포 외 기질 단백질을 합성하는 그들의 능력을 잃는다.

그럼에도 불구하고, 현재자가 인체 섬유 아세포를 배양하는 기술은 실험적으로 제거되어 위의 단점을 제거하고 정상 섬유 아세포의 발암 성 변형을 유도하지 못한다. 이 방법으로 얻은자가 조직 섬유 아세포는 얼굴의 연조직 결손을 채우기 위해 사용됩니다. H. Keller와 공동 저자 (2000)의 연구에서 주름과 위축성 흉터가있는 37 세에서 61 세 사이의 20 명의 환자가 치료를 받았다. 피부 생검 우리 배지 (항생제 베코 mikoseptikom, 피루브산 및 소 태아 혈청) 10 ㎖을 함유하는 멸균 튜브에 실험실로 이송 (4mm) BTE 영역. 상기 물질을 직경 60 mm의 3-5 배양 접시에 넣고 5 % CO2를 함유 한 온도 조절기에서 항온 처리 하였다. 1 주일 후, 세포를 트립신 처리에 의해 접시에서 꺼내어 25cm2 바이알에 넣었다. 세포를 4 × 107 중요하고 오래 지속되는 임상 효과 보정 팔자 주름 환자에서 관찰의 양으로 환자에게 투여하고,자가 섬유 아세포의 제 7 이식 후 12 개월 후 상처 환자된다. 유세포 분석에 따르면, 배양 된 섬유 아세포는 대량의 I 형 콜라겐을 생성했다. 시험 관내 연구에서는 주사 가능한 섬유 아세포의 정상적인 수축이 나타납니다. 배양 된 섬유 아세포를 4 x 107 cells의 피하 투여 후 2 개월 째, 누드 마우스는 검출되지 않았다. 주사 가능한 섬유 아세포는 환자에서 흉터 형성 및 섬유증을 유발하지 않았다. 저자에 따르면, 이식 된자가 섬유 아 세포는 지속적으로 콜라겐을 생성 할 수있어 미용 적 회춘 효과를 나타낼 수 있습니다. 이 경우, 분화 된 세포의 수명이 제한적이기 때문에 젊은 환자의 섬유 아세포가 노인의 섬유 아세포보다 효과적입니다. 앞으로 젊은 기증자로부터 얻은 섬유 아세포 배양 물의 냉동 보존 가능성은 나중에 자신의 젊은 세포 노인 환자에게 이식하는 것으로 가정된다. 결론적으로, 기능적 보존 상태에서자가 섬유 모세포가 얼굴의 연조직 결손을 교정하는 이상적인 수단이라는 전적으로 정확한 결론은 아닙니다. 동시에, 저자 자신은 연구 과정에서자가 섬유 아세포 - 콜라겐 시스템의 사용과 관련된 몇 가지 문제가 발생했다고 지적합니다. 임상 효과는 소 콜라겐을 사용하는 것보다 약한 경우가 많았으며 이로 인해 환자에게 실망감이 생겼습니다.

일반적으로 중간 엽 줄기 세포의 임상 적 사용에 대한 문헌 자료는 매우 낙관적 인 것으로 보인다. 퇴행성 관절 병변의 치료를 위해자가 골수 다 분화 간엽 전구 세포를 사용하려는 시도가있다. 뼈의 복잡한 골절 치료에서 배양 된 중간 엽 줄기 세포의 첫 번째 임상 실험이 수행됩니다. Autologous 및 allogenic mesenchymal cell of bone marrow stroma는 외상이나자가 면역 병변으로 인한 관절 연골 결손을 교정 할 때 이식 목적으로 연골 조직을 만드는 데 사용됩니다. 콜라겐의 I 형 유전자의 돌연변이로 인한 심한 형태의 불완전한 골 형성을 가진 소아에서 골 결손을 제거하기 위해 다 능성 간엽 선조 세포를 임상 적으로 사용하는 방법이 개발되고있다. 심한 골 결손을 보충하기 위해 중간 엽 줄기 세포의 충분한 양을 포함 할 수 있습니다 미분 획 골수와 같은 HLA 호환 건강한 기증자로부터 이식 된 골수의 mieloabelyatsii 어린이 수신자 후. 동종 이식 골수 이식 후, 이러한 어린이들은 섬유 골에 긍정적 인 조직 학적 변화, 성장 속도의 증가, 골절 발생률의 감소를 보였다. 어떤 경우에는 밀접하게 관련된 동종 골수 및 조골 세포를 이식하여 긍정적 인 임상 결과를 얻을 수 있습니다. 골조직에서 골아 세포와 파골 세포의 불균형으로 인한 선천적 인 뼈의 취약성 치료를 위해 MSK 이식을 사용합니다. 이 경우 뼈 형성의 회복은 환자의 뼈 조직에서 줄기 세포와 선조 간질 세포의 키메라 화 (chimerization)로 인해 이루어집니다.

기증자 중간 엽 줄기 세포의 유전 적 변형 방법은 간질 조직의 유전 적 결함을 교정하기 위해 개선되고있다. 중간 엽 전구 세포는 곧 방향 키메라의 뇌 세포에 대한 신경과에서 사용하고 질병의 임상 양상에 대한 책임 결핍 효소 또는 요소를 생성 할 수있는 건강한 세포의 풀을 생성 할 것으로 예상된다. 간엽 줄기 세포의 이식은 라디오 및 화학 요법 후 암 환자의 골수 간질을 복원하고 골수 세포와 결합하여 hemopoiesis를 복원하는 데 사용할 수 있습니다. 중간 엽 줄기 세포를 이용하여 근골격계 결함 제거 목적으로 대체 요법의 개발은 중간 엽 줄기 세포의 자손 거주 골격을 형성하는 디자인 매트릭스 biomimics 생체 재료 나 엔지니어링을 촉진한다.

중간 엽 줄기 세포의 출처

중간 엽 줄기 세포의 주요 소스는 포유 동물에서 지속적으로 중간 엽 줄기 세포가 섬유 아세포와 같은 골수 기질 세포의 작은 인구를 발표하는 반면, 혈액 세포와 면역 체계로 분화 및 조혈 줄기 세포의 미분화 상태를 유지하는 데 도움이되는 골수 조혈 줄기 세포이다. 특정 조건에서 중간 엽 줄기 세포는 연골과 뼈의 세포로 분화. 저밀도 심기 단핵 골수 기질 세포의 배양 배지에 도금 할 때 사실, 섬유 아세포 능성 중간 엽 전구 세포이며, 부착 세포의 콜로니를 형성한다. 몇몇 저자는 골수가 할 수있는 능력에 자기 갱신과 높은 차별화 가능성, 신체의 모든 조직 생활 포유 동물의 유기체를 통해 중간 엽 기질 세포를 전임자를 제공, 감사 커밋되지 않은 중간 엽 줄기 세포를 기탁 것을 제안했다.

골수에서 간질 세포 요소는 정현파와 뼈 조직 사이의 공간을 채우는 네트워크를 형성합니다. 성인의 골수에서 휴면 MSC의 함량은 조혈 줄기 세포의 수와 비슷하며 0.01-0.001 %를 초과하지 않습니다. 골수에서 분리되고 배양되지 않은 간엽 줄기 세포에는 점착 분자가 없다. 그러한 MSC는 CD34, ICAM, VCAM, I 형 및 III 형 콜라겐, CD44 및 CD29를 발현하지 않습니다. 따라서, 시험 관내 중간 엽 줄기 세포는 배양 용 기재 상에 고정되지 않고, 고급 전구 유래 중간 엽 줄기 세포는 상기 세포 골격 성분 및 세포 부착 분자의 수용체 장치를 형성했다. 표현형 CD34를 가진 간질 세포는 CD34 양성 단핵 세포보다 골수에서 훨씬 적지 만 말초 혈액에서도 발견됩니다. 혈액으로부터 분리되고 배양 물로 옮겨진 CD34 세포는 기질에 부착되어 섬유 모세포 유사 세포의 콜로니를 형성한다.

포유 동물과 인간의 모든 장기와 조직의 배아 기간 기질 기준시 이전 및 기관 형성의 단계에서 중간 엽 줄기 세포의 공통 풀에서 발생하는 것으로 알려져있다. 따라서, 성숙한 몸체에서는 대부분의 간엽 줄기 세포가 결합 조직과 뼈 조직에 있어야한다고 믿어집니다. 기질 느슨한 결합과 뼈 조직의 세포 요소의 대부분은, 그러나, 체외에서 증식 할 수있는 능력과 클론의 형성을 유지 최선을 다하고 전구 세포들로 제시 것을 알 수있다. 조직 및 연조직 기관 간의 조혈 기질 요소를 이식 중간 엽 전구 세포의 20 % 이상에 대한 혈류에 이러한 세포의 도입.

중간 엽 줄기 세포의 잠재적 인 소스는 지방 조직입니다 지방 세포 전구 세포의 다양한 각도에서 발견 최선을 다하고 줄기 세포의 어느 사이. 간질 혈관 세포, 골수 능성 간엽 전구 세포는 스테로이드, 인슐린 유사 성장 인자 및 인슐린의 작용에 의해 지방 세포로 분화 할 수와 동일하다 - 지방 조직 중 적어도 성숙한 선조 엘리먼트. 간질 혈관 세포의 배양 지방 세포 및 골아 세포에 형성되어 지방 세포 및 연골 세포 및 지방 조직의 골수 유래 세포로 분화.

근육에서 간질 줄기 근원도 발견되었습니다. 인간의 골격 근육에서 분리 된 차 배양 세포, 별 모양의 세포와 다핵 myotubes을 보여준다. 말 혈청 성상 세포의 존재 cytodifferentiation 징후없이 분화 배지는 골격 평활근, 뼈, 연골, 및 지방 조직의 표현형 셀 소자 셀의 외관을 특징으로하는 덱사메타손의 첨가 후 시험 관내에서 증식. 따라서, 인간 근육 조직에 확정하고 커밋 된 다 능성 간엽 전구 세포로 표현. 골격 근육에 존재하는 전구 세포의 인구가 커밋되지 않은 능성 골수 중간 엽 전구 세포에서 유래와 근육 조직 위성 세포는 다른 것을 알 수있다.

그들은 골격근, 심장 근육 세포의 지방 세포, 골아 세포, 연골 세포, 평활근 세포, myotubes로 분화 덱사메타손의 영향으로 신생아 래트 심근 또한, 다 능성 간엽 전구 세포의 분화 잠재력에 적합한 접착제 성상 세포를 발견했다. 이는 혈관 평활근 세포 (혈관 주위 세포)가 다 능성 미분화 혈관 주위 간엽 전구 세포가 유래 된 것을 도시하고있다. 혈관 주위 중간 엽 줄기 세포의 문화에서 - 평활근 액틴 및 혈소판 유래 성장 인자 수용체를 표현하고 적어도 평활근 세포를 구별 할 수 있습니다.

줄기 보호 구역 (stem reserve)과 관련하여 특별한 장소는 연골 조직으로, 다 능성 중간 엽 줄기 세포 또는 분화 및 성장 인자의 결핍으로 인해 극단적으로 낮은 회복력이 있다고 믿어진다. 연골 형성 및 골 형성에 사전 기증 된 다 능성 중간 엽 전구 세포가 다른 조직 공급원의 연골 조직에 들어간다고 가정한다.

힘줄에서 중간 엽 줄기 세포의 위탁에 대한 조직 기원 및 조건도 확립되어 있지 않다. Ekspermentalnye 관측은 제 1 통로에서 차 문화 출생 초기 토끼 아킬레스 건 세포와하는 콜라겐 타입 I과 관련성이 밝혀 져야만의 발현을 유지하는 것이 좋습니다,하지만 더 배양에 그들은 tenotsitov 차별화 마커를 잃게됩니다.

참 능성 중간 엽 전구 세포의 다양한 조직에서 현지화 여부를 질문에 대한 답은 항상 자신의 기질에 존재하는, 또는 중간 엽 줄기 세포의 조직 풀, 그것은 여전히 기다리고있다 간질 골수 줄기 세포의 이동에 의해 보상되는 것은 아니다.

또한 중간 엽 줄기 세포의 다른 소스 골수 등의 중간 엽 조직 영역 성인 제대혈 될 수있다. 또한 탯줄 정맥 혈액 전위를 미분함으로써 골수 유래의 다 능성 간엽 전구 세포 부착 능력, 그리고 떨어진다 능성 간엽 전구 세포와 유사한 형태 및 항원 특성을 갖는 세포를 포함하는 것이 밝혀졌다. 5 내지 10 % 커밋 능성 간엽 전구 세포로부터 검출 된 제대혈의 중간 엽 줄기 세포를 배양한다. 그것은 제대혈에서 자신의 번호가 태아 개발하는 동안 다양한 조직에 다 능성 중간 엽 전구 세포의 이동의 간접적 인 증거 재태 연령에 반비례 것으로 밝혀졌다. 태아 줄기 세포의 알려진 능력을 기반으로 제대혈에서 분리 된 중간 엽 줄기 세포의 임상 응용 프로그램뿐만 아니라 배아 유래 생체 재료에 대한 제 1 정보는 통합과 장기 및 조직 시스템 성인 수신자의 기능 prizhivlyatsya 있었다.

중간 엽 줄기 세포의 새로운 출처 찾기

다른 태아 세포와 마찬가지로 배아 기원의 중간 엽 줄기 세포를 사용하면 수많은 윤리적, 법적, 법적 및 입법상의 문제가 발생합니다. 따라서, extraembryonic 세포 기증자 물질에 대한 검색이 계속됩니다. 시도는 인간의 피부 섬유 아세포의 실패 임상 응용 프로그램, 그것은 훨씬 적은 잠재적 확산을 갖는 성장 인자의 제한된 수를 생산하는 섬유 아세포에 기술의 높은 재정 능력뿐만 아니라 섬유 세포의 급속한 분화뿐만 아니라 의해 결정이었다. 생물학 및 중간 엽 줄기 세포 분야에서 더 진전자가 중간 엽 줄기 세포의 임상 사용을위한 전략을 개발 할 수 분화능 중간 엽 골수 전구 세포이다. 무엇보다도 MSC의 분자 표지 스펙트럼에 대한 연구가 필요합니다. 분리, 재배, 생체 외 생식 및 직접 분화 기술이 필요합니다. 그들의 분석은 사람의 뼈 조직의 일차 배양에서 여러 종류의 다 능성 중간 엽 줄기 세포가 있음을 보여주었습니다. Pro-osteoblast 표현형은 stromal precursor cells STRO-1의 마커를 발현하지만 osteoblast marker - alkaline phosphatase를 가지고 있지 않은 세포에서 발견되었다. 이러한 세포는 mineralized bone matrix를 형성하는 능력이 낮고 osteopontin과 부갑상선 호르몬 수용체의 발현이 없다는 특징이 있습니다. 알칼라인 포스파타제를 발현하지 않는 STRO-1 양성 세포의 유도체는 중간 및 완전 분화 된 골아 세포로 대표된다. 인간의 소주 골의 STRO-1 양성 세포의 세포주는 성숙한 골 세포와 지방 세포로 분화 할 수 있다는 것이 확인되었다. IL-1β 및 종양 괴사 인자 A (TNF-a)뿐 아니라 항 염증 및 면역 억제 성 TGF-B - 이들 세포의 분화 방향은 고도 불포화 지방산, 염증성 사이토 카인의 노광에 의존한다.

CD45, CD34 및 CD14 - 나중에는 다 분화능 중간 엽 전구 세포는 고유의 표현형 그들에게 특정 부족하지만, 중간 엽, 내피 세포, 조혈 세포 immunophenotypic 항원의 발현의 부재에서 상피 및 근육 세포의 특성 복잡한 마커를 표현하였습니다. 또한, 구조적으로 중간 엽 줄기 세포와 inducibly 조혈 및 비 - 조혈 성장 인자, 인터루킨, 및 케모카인, 일부 성장 인자 및 사이토 카인에 대한 수용체를 발현 능성 간엽 전구 세포의 생산. "성인"줄기 세포 마킹, 그와 다른 세포는 CD117을 표현 - 기질 세포 중 인체의 기본은 원시 5- 플루오로 우라실 능성 중간 엽 전구 세포의 항원 프로필과 거의 동일 면역 표현형과 dormantnye 또는 휴식 세포를 발견했다.

따라서, 중간 엽 줄기 세포 특유의 세포 마커는 아직 확립되지 않았다. 그들이 골관절염 (Cbfa-1), 또는 지방 조직 (PPAR-γ-2)에 커미트의 세포 마커를 발현하지 않기 때문에 휴식 세포가 다 능성 간엽 전구 세포의 집단이 커밋 것으로한다. 급속한 성장을 특징으로 말기 차별화 최선을 다하고 전구체의 형성에 태아 혈청 결과 천천히 증식하는 세포를 휴식의 장시간 노출. 이러한 간엽 간엽 세포의 클론 성장은 FGF2에 의해지지된다. 그것은 게놈에서 유래 기질 줄기 세포가 꽉 충분히 엽 줄기 세포에서 자발적인 차별화의 부재에 대해보고 된 바있다 "폐쇄"라는 표시 -. 짝수가 중간 엽 시리즈의 세포로 변환되지 않습니다 커밋을위한 특별한 조건없이.

기질 세포 선 및 일차 문화에 중간 엽 줄기 세포가 검색됩니다 분화 마커 단백질을 유도 인구 구조를 연구합니다. 클론 콜로니 에세이 골수 세포 시험 관내에서 EGF의 차 배양을 실시 할 때 하이드로의 첨가 엽 줄기 방향의 조골 세포 분화 마커 인 알칼리 포스파타제의 발현을 활성화하면서, 콜로니의 평균 크기를 증가시키고, 알칼리 포스 파타 아제의 클론 발현을 감소 시킨다는 것을 발견 하였다. STRO-1에 대한 모노클로 날 항체는 분리 가능한 이종 시스템 덱스터 문화 STRO-1 양성 부착 세포의 연구 개체군했다. 시토 킨의 스펙트럼뿐만 아니라, 증식 및 림프 조혈 세포의 분화를 조절할뿐만 아니라, 형성, 파라, 자동 내분비 메커니즘에 의해 형성 및 골 조직의 재 흡수에 참여한다. 이러한 캠프 디아 실 글리세롤, 이노시톨 트리 포스페이트 및의 Ca2 + 등의 이차 메신저 수용체 매개 방출은 관련 수용체를 발현하는 세포의 간질 조직의 다양한 종류의 마커 분석을 위해 사용된다. 마커로서 모노클로 날 항체의 사용은 T 및 B 의존 존 세망 세포 속하는 기질 림프 기관을 확립 할 수 있었다.

조만간 조혈 줄기 세포에서 MSC의 기원 가능성에 대한 문제를 둘러싸고 과학 분쟁이 계속되었다. 실제로, 단층 배양으로 골수 세포를 현탁시킨 상태에서 섬유 모세포의 분리 된 콜로니가 성장한다. 그러나, 섬유 아세포 식민지와 골수의 일부로서 조혈 조직의 다양한 세균 차별화의 전구 물질의 존재가 조혈 줄기 세포의 공통 기원의 증거가없는 것으로 나타났다. 조혈 세포의 histogenetic MSC 인구의 독립적 인 골수에 존재를 증명 이소성 이식의 미세 환경은 골수의 조혈 세포가 전송되는 것을 발견 골수 줄기 세포의 판별 분석을 사용.

또한, 선택적 복제 방법은 자신의 특성, 증식 및 분화 가능성을 연구하기 위해 그 수를 결정하기 위해 전구 세포의 새로운 카테고리의 골수 기질 세포의 단층 문화에서 밝혔다. 이는 시험관 내 섬유 아세포와 같은 간질 세포 증식 및 이배체 콜로니를 형성하는 것이 발견되었을 때 그 새로운 조혈 기관의 형성을 보장하는 신체에 이식 역방향. 개별 클론의 연구 결과는 간질 조직, 기질 전구 세포의 조혈 줄기 세포의 Gistogeneticheskaja의 독립의 줄기 세포의 역할을 주장 할 수 그들의 증식 및 분화 가능한 세포의 인구가 있음을 나타냅니다. 이 집단의 세포는 자립 성장을 특징으로하고 뼈, 연골 및 망상 골수 조직의 전구 세포로 분화한다.

큰 관심 배양 된 골수 유래 간질 전구 세포 토끼, 기니피그, 그리고 태아 혈청 A-MEM 배지의 쥐였다 연구 Chailakhyan R. 등 (1,997에서 2,001 사이)의 결과이다. 저자들은 1 cm2 당 2-4 x 103 개의 골수 세포의 초기 밀도로 explantation을 수행했다. 사용 피더 동종 또는 이종 도즈 공급기 유지 동작에서 골수 세포의 조사에 의해 불 활성화되지만 완전히 차단 증식한다. 섬유 모세포의 2 주간 이산 형 콜로니가 단일 클론 균주를 생성하기 위해 트립신 처리되었다. 증거 클론 원점 식민지는 남성과 여성의 기니 돼지, 시간 경과 촬영 라이브 문화의 골수의 혼합 문화뿐만 아니라 동계 마우스와 CBA SVAT6T6의 골수의 혼합 문화에서 염색체 마커를 사용하여 얻을 수 있었다. 신장 캡슐 밑에 관내 또는 간질 섬유 아세포 성장 갓 절연 골수 세포 이식 슬러리 ivalonovyh 다공성 지지체 또는 젤라틴뿐만 아니라 비활성 토끼 해면골 행렬에서 행 하였다. 연부 조직 및 골막에서 청소 뼈 커버 허벅지 기니 돼지에 이식 복제는 골단을 절감하고 철저하게 자신의 골수를 세척. 뼈를 파편 (3-5 mm)으로 절단하고, 건조시키고 60 Gy의 선량으로 조사 하였다. 뼈 덮개에서, 개별 섬유 아세포 콜로니를 근육 내로 놓고 이식 하였다. 시험 관내에서 성장 간질 섬유 아세포의 복강 내 이식을 위해, 우리는 종류를 확산 실 (V = 0,015cm 3, H = 0, L 개의 mm) 및 D (V = 0.15 cm (3), H = 2 mm)를 사용 하였다.

클론 균주 Chailakhyan R. 등 (2001)의 성장의 역학을 공부하면 각각의 세포는 콜로니 형성하는 섬유 아 세포뿐만 아니라 그들의 후손이 큰 증식 잠재력을 가지고 있음을 발견했다. 제 10 유로으로 일부 변형에서 섬유 아세포의 수는 10이었다 1,2-7,2 X ⁹ 세포. 개발 과정에서 그들은 31-34 개의 세포 복제를 수행했습니다. 수십 클론 새 영역의 조혈 장기 이식에서 골수 미세 환경과 교육의 전송을 주도 간질 전구체에 의해 형성된 골수 유래 균주 따라서 이소성 이식. 저자는 개별 클론 골수 미세 환경의 간질 세포를 허용 할 수 있는지 여부의 질문을 제기, 또는 여러 가지 다른 클론 원성 간질 전구의 협력을 필요로? 그리고 개별 클론은 세 가지 세균 혈액의 전체, 또는 다른 클론이 다른 세균에 대한 조혈 미세 환경의 형성을 제공 여부, 미세 환경을 전송할 수 있습니다 경우? 이러한 문제를 해결하기 위해 당신이 이후 이소성 이식 식민지를 성장 섬유 아 세포의 표면에서 촬영 할 수 있습니다 콜라겐 젤에서 재배 기질 전구 세포의 기술을 개발하고있다. 개별 클론 간질 섬유 아세포, 겔 코트 이식 이소성의 단편과 함께 절단 CBA 마우스 및 기니아 피그에서 성장 골수 세포 - 동계 마우스 또는자가 근육 배꼽 기니아 피그의 신장 캡슐 밑에. 근육으로 이식되면 젤의 콜로니가 뼈 덮개에 놓입니다.

발명자들은 뼈 또는 뼈와 조혈 조직의 이식 지역 개발에서 관찰 된 사례의 20 %에서 골수 섬유 아세포 식민지의 이식 후 50~90일에 의해. 받는 동물의 5 %에서 골수로 채워진 캐비티를 갖는 뼈의 주머니를 형성. 뼈 내부 실린더 이러한 초점은 둥근 모양의 뼈 조직 생성 캡슐, 골 세포와 골아 잘 개발 된 층을 갖는다. 골수 공동은 골수 세포 및 적혈구 정상 골수 다를 있지 않은의 비율과 망상 구조를 포함한다. 신장 이식은 뼈 캡슐 신장 캡슐 만 골수 공동 커버 네이티브 골수 이식에 의해 형성된 전형적인 골수 체였다. 조혈 조직은 골수, 거핵 세포와 적혈구 요소가 포함되어 있습니다. 뼈 속질의 기질은 부비동 잘 개발하고 전형적인 지방 세포 시스템을 포함한다. 조혈의 흔적 일부 식민지 뼈 이식의 영역에서 동시에 그것은 신장 캡슐에서 발견되었다. 개별 클론의 증식 및 분화 효능 연구는 세포 배양 배지 및 토끼의 골수 공여의 신장 캡슐 밑에 꿰매어 1-2 mg 중량 별도 ivalonovoy 스폰지에 재현 탁되고, 클론 토끼 골수 계통에서 계속 하였다. 이러한 세포는 21 클론 균주를자가 이식을 행 하였다. 결과는 2 ~ 3 개월 내에 고려되었습니다. 저자는 발견 성형체 조혈 세포 가득 뼈 골수 공동의 구성 이식 된 골수 클론 균주의 14 %. 사례의 33 %에서 이식 된 균주를 개발하고 골아 층 벽돌 ostootsitami 다른 크기의 캐비티로 치밀골 형성. 어떤 경우에는, 스폰지 이식 복제 뼈 또는 조혈 세포없이 그물을 개발했다. 때로는 망상 기질 형성은 사인 곡선의 잘 발달 된 네트워크에 발생하지만 조혈 세포를 채워집니다. 따라서, 얻어진 결과는 콜라겐 겔 클론의 이식에 의해 수득 된 것과 유사 하였다. 15 % 망상 직물 - - 단, 클론 이식은 골 조직의 형성 결과, 기판 상에 성장하면 뼈의 5 %가되는 경우의 80 %에 이식 모노클 뼈의 경우 14 %에서 관찰되었다 골수 세포의 형성을 균주 - 53 %, 망막 - 53 %. 저자들에 따르면,이 다공성 지지체 상에 이식 된 각막 섬유 아세포의 증식 및 분화 잠재력의 실행을위한 조건은 뼈 이식과 그 이상 최적이라고 나타내며 콜라겐 기질을 포함한다. 재배와 클론 피드백 이식의 더 진보 된 방법의 사용은 클론 차별화 잠재력의 이행을위한 조건을 개선하고 이러한 관계를 변경할 수 있음을 배제하지 않는다. 충분히 큰를 적혈구, 골수 및 거핵 세포 생성, 조혈 조직 및 발판 : 한 가지 방법 또는 다른,하지만 연구의 주요 값은 골수 혈액의 세 콩나물 즉시 기질 조혈 미세 환경을 보장하면서 뼈 조직을 형성 할 수있는 클론의 일부 간질 세포가 있다는 사실에있다 어떤 뼈 덩어리.

또한 저자는 확산 실의 폐쇄 형 시스템에서 개별 클론 원성 기질 선조 세포의 세포 분화의 이러한 유형에 대한 용량의 문제를 해결. 능성 전시 또는 잠재적 분화 용 디스플레이의 개별 클론 고정 기호 cytodifferentiation 여러 클론의 협동 상호 작용을 필요로 하는지를 또한, 판단 할 필요가 있었다 상이한 비율은 뼈, 연골 또는 망상의 우선적 형성을 결정한다. 두 방법 론적 접근을 결합함으로써 - 골수 기질의 구조적인 조직의 이해를 접근해서 결과를 얻을 모노클은 골수 간질 전구 세포를 분리하고, 확산 실, Chailakhyan R. 등 (2001) 등으로이를 이식. O 형 세포에 이식 클론 균주 기질 모세포 동시에 뼈와 연골을 형성 한 콜로니 형성 기질 세포의 자손의 능력을 보여주는 두 뼈 및 연골 조직의 형성을 초래. 뼈 및 연골 조직은 공통 기질 전구 세포로부터 유도 된 가정은, 이전에 반복적으로 나타냈다. 그러나이 가설에는 올바른 실험적 확인이 없었습니다. 확산 챔버에서 뼈와 연골 형성 줄기 세포의 존재는 조직의 두 가지 유형에 공통 골수 기질 전구 세포를 포함 증명하기 위해 필요했다.

그 다음, 토끼 골수의 일차 배양으로부터 얻은 두 번째 및 세 번째 계통의 29 개 클론 계통을 확산 챔버에 넣고 동종 동물을 복강 내에 이식 하였다. 연구에 따르면 골수 단클론 성 균주의 45 %가 골 형성 가능성을 가지고 있음이 밝혀졌습니다. 예외적으로, 망상 조직은 9 개의 챔버를 포함하고 있었지만 뼈와 연골 조직과 함께 13 개의 더 많은 챔버에 존재하여 모든 계통의 76 %를 차지했습니다. 골과 연골 조직 모두 분화가 가능한 O 형 챔버에서 16 균주가 연구되었다. 4 개의 챔버 (25 %)에서 뼈와 연골 조직이 형성되었다. 이는 다시 연구 Chailakhyan R. 등은 (2001) 각각의 전구 세포가 31 ~ 34 배화 구성된 세포주를받은 것을 유의해야하고, 그 자손은 0.9-2.0 × 10이었다 ⁹ 세포. 다 클론 성 균주의 전구 세포가 노출 된 분열물의 수는 실질적으로 단일 클론 균주의 세포와 동일 하였다. 동시에, 폴리 클로 날 균주의 발생 속도는 특히 그 형성의 첫 번째 단계에서 균주의 개시에 사용 된 콜로니의 수에 상당한 영향을 받았다. 12 ~ 15 수준의 중복으로 재 형성되었을 때 인간 배아 섬유 아세포 (WI-38)의 이배체 균주도 직경과 세포의 함량이 다른 콜로니를 형성했다. 103 개 이상의 세포를 포함하는 큰 콜로니는 5-10 %에 불과했다. 분열 수의 증가에 따라 커다란 식민지의 비율이 감소했다. 모노 클론 및 골수 간질 섬유 아세포 균주 20 개 이상의 세포 분열 후에 설정 이배체 염색체를 보유하고, 현상의 경향은 이배체 균주 배아 섬유 아세포의 역학에 필적 하였다. 단일 클론 균주를 확산 챔버에 이식하여 수행 한 각 골수 기질 전구 세포의 분화 가능성을 분석 한 결과, 그 중 절반이 골 형성되어 있음이 나타났다. 대형 식민지가 전체 수의 10 %를 차지했습니다. 결과적으로, 골 형성 콜로니 형성 세포의 수는 그들의 전체 개체군의 약 5 %에 해당한다. 저자에 의해 확인 된 골 형성 선조 세포의 전체 질량에는 골과 연골 조직을 동시에 형성 할 수있는 세포가 있었다. 테스트 클론의 25 %가 유사한 세포에 의해 생성 된, 및 전구 세포의 일반 인구에서의 숫자보다 2.5 % 아니었다 : 처음은 성인 유기체의 조직의 두 가지 유형의 일반적인 전구 세포는 것을 발견했다.

따라서, 골수 섬유 아세포의 개별 클론의 이종 이식 (heterotopic) 이식은 중간 엽 전구 세포 집단의 구조적 조직의 새로운 측면을 열었다. 다른 모델에 큰 조사 클론 중 수는 5 내지 15 % (검출 된 선조 세포의 수의 0.5 ~ 1.5 %)로 모든 조혈 줄기 즉시 특정 미세 환경을 전송할 수있는 발견 기질 전구 세포. 클론과 함께 완전한 골수 미세 환경을 전송 만 개방 시스템으로 전송 형태의 골 형성, 조혈의 개발을 지원하지 않는 뼈에 결정적 전구 세포가있다. 전구 세포 총 수에서 그들의 수는 1.5-3 %입니다. 이 세포 중 일부는 제한된 자체 유지 관리 기간 동안 뼈 조직을 형성 할 수 있습니다. 결과적으로, 간질 선조 세포의 개체군은 그것의 분화 가능성에있어서 이질적이다. 그 중 골수 간질 조직에 내재 된 세 가지 차원으로 차별화 뼈, 연골 및 망상 조직을 형성 할 수있는 기질 줄기 세포의 역할을 주장, 셀 종류가있다. 이러한 데이터는 우리가 다양한 세포 마커의 도움으로 특정 조직의 미세 환경의 간질 세포의 각 유형의 기여를 결정하고 덱스터 문화에 조혈을 지원하기 위해 할 수 있기를 바랍니다 수 있습니다.

중간 엽 줄기 세포의 특징

최근에서는 골수 정적 배양에서 간엽 능성 전구 세포는 세포 증식에 특이 기-67 항원 발현 집락 부재 낮은 능력을 특징으로 작은 agranular 셀 (RS-1) 세포의 한정된 집단을 제공하였습니다. 휴면 RS-1 세포의 항원 매개 변수는 빠르게 번식하는 위탁 간질 선조 세포의 항원 스펙트럼과 다르다. 커미트 전구 세포의 높은 증식 속도가 RS-1 세포의 존재에서만 관찰된다는 것이 발견되었다. 이어서, RS-1 세포는 다 능성 중간 엽 줄기 세포의 가장 성숙한 유도체에 의해 분비 된 인자의 영향하에 성장 속도를 증가시킨다. RS-1- 셀은 재사용이 가능한 커밋되지 않은 MSC의 하위 클래스 인 것으로 보입니다. 저 RNA 함량 오르니 틴 디카 르 복실 라 아제 유전자의 발현 수준이 높은 것을 특징으로 골수 5- 플루오 기질 전구 세포에 내성 시험 관내 - 마커 세포 비 증식.

간질 선조 세포의 집중적 인 번식은 기질상의 고정 후에 시작된다. 경우 미분화 세포의 발현 마커 정보 : SH2 (TGF-β 수용체 (3), SH3 (도메인 시그널링 단백질), 콜라겐 유형 I 및 III, 피브로넥틴, 접착 수용체 VCAM-1 (CD106) 및 ICAM (CD54), 카데-11 , 클론 성장 반복적 많은 유전자 동질 기질 선조 능성의 배양 물을 제조하는 중간 엽 줄기 세포를 계대 가능 CD90, CD120a 및 CD124하지만, 조혈 줄기 세포 (CD34, CD14, CD45)에 특징적인 마커의 발현없이. CD44, CD71 (트랜스페린 수용체) 세포. 2-3 그 수의 통로가 50-300 만 도달한다. 충분한 농도의 배양액에 기질 전구 세포의 증식을 정지 한 후에, 조혈 조직 섬유 아세포, 지방 세포, 근육 세포, 연골 세포, 뼈 조직으로 분화 달리. 세 분화 조절 신호의 조합을 1- 메틸 izobutilksantin (세포 내 cAMP를 형성의 유도), 덱사메타손 (dexamethasone) 및 인도 메타 신 (시클로 옥 시게나 제 억제제, 트롬 저하 활동) (A 및 포스 포 리파제 C의 억제제)를 포함 돌게 지방 전구 세포의 95 %까지 지방 세포. 미성숙 간질 세포로부터 지방 세포 형성 지단백질 리파제 유전자 peroxysomal 아포지 단백질 및 수용체의 발현 조직 화학적 동정을 확인 하였다. 무 혈청 배지에서 TGF-B에 의해 영향을 동일한 클론의 세포는 연골 세포의 균일 한 집단을 만듭니다. 특징 연골 세포 외 기질의 다층 세포 배양은 프로테오글리칸 및 콜라겐 타입 II로 이루어지는 개발 하였다. 동일한 배양 기질 전구 전구 세포에서 B-글리세로 이루어진 10 % 태아 혈청 효과 분화 신호 복합체 (증정 무기 인산), 아스코르브 산 및 덱사메타손과 함께 영양 배지는 세포 응집체의 형성을 이끈다. 이러한 세포에서 세포 내 칼슘의 점진적인 증가를 확인 광물 뼈의 형성을 나타내는 알칼리 포스파타제 폰틴 수준의 활성의 점진적인 증가가있다.

일부에 따르면, 중간 엽 줄기 세포의 능력은 무한 분할하고 소성 높은 수준의 결합 된 중간 엽 세포 계통의 다양한 형태의 재생. 심실 또는 백질 중간 엽 줄기 세포에 투여하면 신경 조직의 실질에 마이그레이션 또는 신경 아교 세포 유래 세포주로 분화. 또한, 시험 관내 및 생체 내 모두에서 조혈 줄기 세포의 MSC의 분화에 대한 정보가있다. 성상 세포, 희소 돌기 아교 세포, 신경 세포, 심근 세포, 평활근 세포, 골격근 세포로 분화하는 능력 각성 엽 줄기 세포의 매우 높은 연성 판정 일부 연구에 더 깊이 분석. 다수의 연구는 시험 관내 및 생체 내에서 중간 엽 줄기 세포의 잠재력 transdifferentsirovochnogo 골수 유래의 다 능성 간엽 전구 세포는 말단 세포 뼈, 연골, 근육, 신경 및 지방 조직을 형성 줄뿐만 아니라, 힘줄 및 조혈을 지원 기질로 분화 것으로 .

그러나 다른 연구에서, 어떤 중간 엽 줄기 세포의 제한 만능 게놈의 징후는 간질 전구 세포 인구를 감지되지 않을 수 없습니다 만, 차 문화에서 분리 된 200 개 이상의 MSC 클론을 조사 하였다 가능한 만능 기질 세포를 확인 할 수 있습니다. 체외 클론의 대부분은 골 형성, 연골 세포 및 지방 세포 방향으로 분화 할 수있는 능력을 유지했다. 신장 캡슐 밑에 또는 확산 실에서 중간 엽 줄기 세포의 이식에 의한 수신자 세포의 이동 확률을 제외하면 그 시츄 그 기질 전구 세포가 존 이식 제한 인자의 부재 또는 단독 능성 엽 줄기 세포의 부재 중 어느 하나를 나타내는 이종 표현형을 유지 나타났다. 동시에 성체 줄기 세포의 일반적인 전구 물질이다 체세포 만능 줄기 세포의 드문 유형의 존재를 허용했다.

진정한 멀티 있지만 만능 중간 엽 줄기 세포는 골수 세포의 아주 작은 부분을 구성하고 특정 상황에서 할 수있는 일 뼈, 연골, 지방, 근육 조직에서 세포의 자신의 유도 혈통의 노력에 의해 입증, 때 체외에서 배양는 차별화에 들어오는없이 증식하기 및 조혈를 지원 tenotsity와 기질 요소이다. 일반적으로 태아 혈청 배지에서 지속적으로 노출이 최선을 다하고 전구 세포의 기질에 출력 중간 엽 줄기 세포를 유발, 자손은의 자발적인 최종 차별화를 겪는다. 분화의 조합 덱사메타손 신호 및 인슐린이 지방 세포 형성을 유도하면서, 배지를 조절 덱사메타손, 베타 글리세로 포스페이트 및 아스코르브 산을 첨가하여 조골 세포 지향성 형성을 달성하는 것이 가능 시험관.

골수 중간 엽 줄기 세포의 말단 분화의 단계를 입력하면 특정 배양 조건을 생성하기 전에 초기 섬유 아세포와 같은 중간 엽 줄기 세포로 분화한다는 세웠다. 생체 내에서 이러한 세포의 파생 상품은 뼈, 연골, 힘줄, 지방과 근육 조직의 형성뿐만 아니라 기질 지원 조혈에 참여하고 있습니다. 많은 저자는 실제로 중간 엽 줄기 세포로 용어 "다 능성 중간 엽 전구 세포"를 이해하고 최선을 다하고 기질 전구 세포와 골수 중간 엽 조직. 골수 유래의 중간 엽 다 능성 전구 세포의 클론 분석은 다른 클론 세포 반면, osteo-, hondro- 및 지방 세포에서 차별화 된 클론의 조금 더보다 세 번째 골 형성 잠재력과 형태만을 hondro- 및 골 세포를 가지고 있음을 보여 주었다. 조혈 모세포를 지원, 연골 및 ADIC potsitov하지만 간질 세포뿐만 아니라 표현형 및 기능적 특성을 갖는 세포로 분화 적절한 조건 하에서 미세 IUD -9- 같은 다 능성 간엽 전구 세포의 클론. 다른 표현형의 RCJ3.1 차별화 된 중간 엽 세포는 태아 쥐의 골수 세포에서 복제입니다. 이 클론의 세포 요소의 아스코르브 산, B-글리세 및 덱사메타손의 합성 작용에 의해 제 다핵 근세포를 형성하고, 연속하여, 지방 세포, 연골 세포 및 골 섬 광물이다. , osteo- 및 지방 세포 및 평활근 세포의 분화 마커를 발현하지 않는, 확산 저속 특징 및 hondro- 형성 배양 조건에서 분화 된 바와 같이 래트 태아 골막에서 과립 세포 집단은 커밋 능성 간엽 전구 세포에 상응한다.

따라서, 중간 엽 줄기 세포의 plyuri- 또는 능성 게놈의 문제는 결과적으로도 완전히 설치되지 않습니다 기질 전구 세포의 분화 잠재력의 표현에 영향을 미치는, 여전히 열려 있음을 인식해야한다.

실험적으로 증명 된 간엽 줄기 세포의 중요한 특징은 조직의 틈새를 빠져 나가 일반 혈류를 순환하는 능력입니다. 분화의 유전 프로그램을 활성화하기 위해 순환하는 줄기 세포는 적절한 미세 환경에 빠져 있어야합니다. 다른 장기와 조직에 이식 세포가 미숙 한 혈류 중간 엽 줄기 세포받는 동물을 체계적으로 관리 할 때, 다음 혈액 세포, 근육 세포, 지방 세포, 연골 세포, 섬유 아세포로 분화 것을 알 수있다. 따라서, 지방 조직의 영역에서 그 주변 성숙한 세포 사이뿐만 아니라 범한 커밋 기질 전구 세포 신호의 규제 작용을 발생한다. 분화 유도 능성 간엽 전구 세포의 미세 환경의 공간적 및 시간적 관계를 제공 분비 조절 간엽 기원 nemezenhimalnogo의 인자 (성장 인자, 에이코 사 노이드, 세포 외 매트릭스 분자)를 수행한다고 가정한다. 따라서, 간엽 조직의 국소 손상 능성 간엽 전구 세포가 생리적 과정 대신 복기 재생 조직의 손상이 발생하는 복소 신호로부터 규제 성적이 상이한 미세 영역의 형성을 초래할 것이다. 이 차이는 정상적이고 손상 유발 된 미세 환경에서 세포 표현형의 특수화 측면에서 매우 중요합니다.

이 아이디어에 따르면 두 가지 알려진 과정의 근본적인 차이 - 생리 학적 재생과 염증성 증식 -의 메커니즘이 마련되어있다. 그 중 첫 번째는 전문화 된 세포 조직 구성과 그 기능의 회복으로 끝나는 반면, 증식 과정의 결과는 성숙한 결합 조직 요소의 형성과 손상된 조직 구역의 기능 상실이다. 따라서 재생 플라스틱 의학에서 다 능성 중간 엽 줄기 세포를 사용하기위한 최적의 프로그램을 개발하기 위해서는 MSC의 분화에 미세 환경 요인의 영향에 대한 특성을 면밀히 연구해야한다.

줄기 세포 구획의 세포 파라 - 및자가 분비 조절 인자에 대한 의존성, 외부 신호에 의해 조절되는 표현은 의심의 여지가 없다. 조절 인자의 기능 중 가장 중요한 것은 MSC의 비대칭 분열 조절과 세포 분열 단계 및 세포 분열 단계를 결정하는 유전자의 발현이다. MSC의 추가 개발이 좌우되는 외부 신호는 미세 환경에 의해 제공됩니다. 지방 세포 라인, 근육 섬유 모세포, 혈행 간질 조직, 연골 세포, 골로 분화하는 능력을 유지하면서 미성숙 엽 줄기 세포에서 충분히 긴 시간을 증식. 전체 혈류에서 혈액 속을 순환하는 SB34 음성 간질 세포 요소의 제한된 개체군이 골수 조직의 간질로 되돌아와 CD34 양성 조혈 줄기 세포주에서 형질 전환된다는 것이 확인되었습니다. 이러한 관찰은 조직의 혈류의 순환 전구 중간 엽 세포가 미성숙 골수 기질 세포의 일반적인 풀을 동원하여 다른 장기에 기질 줄기 세포의 균형에 대한 지원을 제공하는 것이 좋습니다. 여러 중간 엽 표현형 및 실험 동물의 입양 전송 모델에 의해 입증 생체 내에서 수리 또는 뼈, 연골, 힘줄과 지방 조직의 재생에 참여와 세포로 중간 엽 줄기 세포의 차별화. 다른 저자들에 따르면, 혈관 침대를 따라 MSK를 멀리 이동시키는 것은 연골 회복, 근육 재생 및 기타 회복 과정에서 조직 내의 다 능성 중간 엽 전구 세포의 단거리 또는 국소 변위와 결합된다.

지역의 매장량은 간질 조직의 기초가 생리적 조직 재생 과정에서 세포의 역할 소스를 재생하고 지출 간질 조직 줄기 자원으로 먼 전송 중간 엽 줄기 세포에 의해 보충된다 줄기. 그러나, 다수의 외상 셀룰러 복기 용량, 긴급 출동 필요, 재생의 복기 과정에서 중간 엽 줄기 세포의 전체 트레인 참여하고 혈류 주변부는 골수 간엽 전구 세포를 모집.

간엽 줄기 세포의 이식

조직 내 생체 재생 과정과 자궁 내 발달 과정 사이에는 일정한 유사점이 있습니다. 사람과 포유 동물의 배아, 체외, 메조 및 내배엽 배엽 풀로부터 유래 전문 각종 세포의 형성하지만 간엽의 필수 참여. 배아 간엽 조직의 느슨한 세포 네트워크는 수많은 조절, 대사, 골격 및 형태 형성 기능을 수행합니다. 북마크 provisory 몸은 차 형태 발생 신호 기관 형성을 생성 성장 클론 원성 전구 세포의 비용으로 응축 중간 엽 후에 실시한다. 기질 유래 된 배아 중간 엽은 주요 혈관 및 림프관의 성장으로 인해 보장 energoplasticheskogo 미래의 기초를 발판 provisory 몸을 만들고 형성한다. 다시 말해, 태아 기관의 미세 순환 장치의 기질 요소는 구조 기능 단위가 형성되기 전에 나타난다. 또한, 기관 형성기 동안 중간 엽 세포의 활성 마이그레이션 공간 방향은 볼륨 제한 homeotic의 혹스-tepov하여 경계를 표시 인해 장기를 개발하고 제공합니다. 종종 morphogenetically 기능적으로 매우 상이한 셀들 포함 실질 기관의 구조와 기능 유닛의 골격이 발생 기질 및 어셈블리. 따라서, 배 발생 된 중간 엽의 일차 함수 및 지방 전구 세포의 증식 및 상피 세포의 분화를 조절 활성화 신호를 생성함으로써 구현된다. 배아 간엽 세포 등의 실질 전구 세포 수용체에 대응하는 존재하는 피트 HGF-B, CSF와 같은 성장 인자를 생성한다. 성인 유기체 간질 세포 네트워크의 성숙한 분화 된 조직은 기원 nemezenhimalnogo 전구 세포의 생존과 증식을 유지하는 신호를 생성한다. 그러나, 산후의 스펙트럼 간질 규제 신호 ontogenesis 다른 (SCF, HGF, IL-6, IL-1, IL-8, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, GM-CSF, FLT-3, LIF 등)를 제공하고 손상된 조직 영역의 생리적 재생 또는 수리를 제공하기위한 것입니다. 더욱이, 각 종류의 조직 및 심지어 동일한 장기 내 에서조차도 간질 조절 인자의 분광 특성은 상이하다. 조혈 및 면역 세포의 증식 및 분화 특히, 조혈 및 lymphopoiesis의 어느 내 림프 조혈 세포의 성숙 상태를 제공하는 기질 미세 작용, 특정 기관에서 일어난다. 그것은 미세 증식과 미세 틈새 시장으로 성숙 몸을 다시 채워야하는 조혈 및 림프 세포의 능력에 달려 규제 요인에 달려있다.

다 능성 간엽 전구 세포를 생성하는 세포 외 매트릭스의 구성 요소 중에서,이 세포 간 상호 작용의 조직 주요부 골수 뼈의 세포 외 매트릭스의 형성을 수신 피브로넥틴, 라미닌, 콜라겐, 프로테오글리칸,뿐만 아니라 CD44 (히알루 론산 폰틴 수용체)을 주목해야한다 . 골수 중간 엽이 다 능성 세포가 유도 및 규제 신호뿐만 아니라 MSC뿐만 아니라 조혈 전구 물질 및 nemezenhimalnye 골수 줄기 세포를 제공 redshestvenniki 간질 미세 환경을 만드는 것이 증명된다. 자신의 능력에 의해 측정 된 중간 엽 줄기 세포, 조혈 관련된 활성 유도 MSK 신호가 조혈 줄기 세포로부터 얻은 상기 조혈을 지원 간질 세포로 분화하는 것이 알려져있다. 네트워크 기질 전구 세포의 배양은 조혈 세포의 모든 클론의 공급을위한 기초 이유입니다.

성숙한 혈액 세포와 주변의 면역계 세포의 "비용"과 동적 평형 상태에서 혈액 투석 lymphopoiesis의 성숙한 유기체 강도. 골수 기질 세포와 림프 기관은 거의 업데이트하지 않기 때문에 상당한 구조 조정 기질 구조는 그 (것)들에서 발생하지 않습니다. 어떤 기관이 과다 또는 lymphopoiesis에 동적 평형의 시스템을 가져 것은 기질의 구조는 기관 손상으로,뿐만 아니라 조혈 또는 림프 세포의 너무 많은 영향을주는 순차적 인 변화의 동일한 유형에 이르게하는 기계적 손상의 도움으로 가능합니다. 다음 조혈 또는 면역 세포를 다시 채우기 복기 재생 주로 형성된 기질 워크의 처리에서는. 이 긴 알려진 사실은 조혈 기관의 간질 미세 환경 연구를위한 외상 후 재생 편리한 모델을 만든다. 신속하고 효과적으로 동적 평형 상태에서 조혈 조직을 가져올 수 있도록 소파술 - 특히, 골수의 복기 재생의 조사를 위해 긴 뼈의 골수 캐비티를 비우는 기계 사용된다. 경골 기니피그의 medullar 캐비티의 기계적 비우는 후 조혈 및 간질 골수 성분 복기 재생 과정을 연구 할 때 지표 조혈 및 간질 세포의 재생 사이 (조혈 세포의 수 농도와 기질 전구 세포의 양)는 직접적인 관계가없는 것으로 나타났다. 또한,이 기질 전구 세포의 인구의 증가는 소파술 후 이전 날짜에 발생하는 것을 발견하고, 자신 기질 섬유 아 세포는 골 형성 조직의 특성 인 fosfatazopolozhitelnymi 있습니다. 그것은 또한 소파 3-5 긴 뼈가 기니 돼지 만 lymphopoietic 몸에도 비장의 골수에서 세포 인구의 성장과 비 작동 뼈, 리드 것을 설립되었습니다.

경골 기니피그 일반적으로 다른 종의 동물 실험에서 얻은 문헌 데이터에 해당 kyuretirovannyh 골수의 형태 학적 사진 복기 프로세스, 조혈 조직의 제거 후 일어나는 변화의 역학은 모든 종 동일하며 차이는 단지 시간 매개 변수에 관한 . 형태 학적 골수 조혈 캐비티를 복원하는 단계 절차는 또한 조혈 요소를 다시 채우기 정현파 그 물체 기질의 혈병 형성을 거친 섬유 뼈의 재 흡수를 연속 편성 프로세스 비게된다. 조혈 줄기 세포의 함량의 증가에 평행 골수 조직 재생 과정 증가 조혈 전구 세포의 수.

(2001) Gerasimov 유 등은 조혈 세포의 수의 변화 및 재생 공정의 각 단계에서의 간질 세포 전구체의 양을 비교 하였다. 경화 된 뼈에서 골수 세포의 양적 변화는 재생의 형태 학적 특성의 역학과 일치한다는 것이 밝혀졌습니다. 중생 저자의 셀 내용의 3 일 동안의 감소로 인해 망상 조직이 초점의 유골 소파술과 혈관 손상을 형성하기 위해 골단에 남아있는 골수에서 후자에 성장 생성 미세 환경의 부작용에 조혈 세포의 손실 때문이다. 7-12 일째 상승 yaderosoderzhaschih 세포는 골수의 조혈 세포 간질 증식 영역의 개별 초점의 모양과 일치한다. 20 일에 총 세포 수가 크게 증가를 수반 재생 골수와 잘 개발 부비동의 중요한 부분이있다. 그러나,이시기의 조혈 요소의 수는 대조군 수준의 68 %이다. 이 소파술 후 조혈 세포의 수는 35~40일 수술 후 기준에 도달 할 것으로 보여 이전에 게시 된 데이터와 일치한다.

초기 외상 후 기간에, hemopoiesis의 복원에 대한 주요 세포 소스는 소파에 보존 세포 요소입니다. 나중에 말하면, 골수 조혈 조직의 재생의 주요 원천은 줄기 세포이며, 자유 기질 구역을 다시 채운다. 간질 세포 (내피, 망막 및 골 형성)의 특정 범주에 관해서는, 수질 구의 재건 동안 형성을 제공하는 원인은 설명 할 수 없다. Yu.V.의 결과. Gerasimov와 공동 저자 (2001)는 소작술 후에 보존 된 골수에서 섬유 아세포 콜로니를 형성하는 세포의 농도가 정상 골수에서보다 유의하게 높다는 것을 증언한다. 저자는 소파 조혈 세포의 더 강한 선택적 용출이라고 생각 같은 간질 기질 콜로니의 형성에 관여하고보다 견고 조혈 세포 이외의 염기성 물질로 접속되어 형성 세포와 비교 하였다.

섬유 아세포 콜로니를 형성하는 세포의 수의 변화의 역학은 골 형성 과정의 강도 조혈 세포를 채우는 후속 소주 골 흡수와 형성 망상 기질과 상관. 대부분의 기질 전구 세포는 표시된 재생 시간에 거친 섬유질의 뼈 조직과 망막 기질을 형성합니다. 재생 존에서 5 일에 장기간 골 접합 조건에서 대퇴골의 골절 그들의 수는 6 배만큼 증가 집중 세포의 농도와 섬유 아세포 콜로니 형성 수 및 골 형성을 증가시킨다. 섬유 아세포 콜로니를 형성하는 골수 세포는 골 형성 성질을 갖는 것으로 알려져있다. 간질 선조 세포의 수는 조혈 세포에 의한 피질 골수 영역의 식민지화 이전에 증가한다. 이것은 간질 세포가 조혈 미세 환경의 형성을 제공한다는 증거와 잘 일치합니다. 물론, 조혈 미세 환경의 생성은 기질 조직 재생의 특정한 레벨에 대응하고, 조혈 적합한 기질 브리지 헤드 팽창시 조혈 세포의 수를 증가시킨다.

가장 큰 관심의 대상은 저자의 자료에 따르면, 골격의 원격 부분에있는 간질 전구 세포의 수가 증가합니다. 여섯 번째 시간에 시작하고, 반대측 경골 포함하여 20 일 이상 두 배의 농도 증가와 섬유 아세포의 콜로니를 형성하는 세포의 수에서 관찰된다. 이 현상의 메카니즘은 아마도 동시에 혈소판 상당수의 콜로니를 형성하는 세포의 증식을 유발하는 것으로 알려진 된 혈소판 유래 성장 인자 (RBSK)으로 분리 파괴하면서 방대한 골수 부상 혈전 다수의 형성을 초래한다는 사실과 연결되어 증식 웅덩이 밖의 몸에있는 섬유 아 세포. 토끼 실험에서 국소 투여는 중간 엽 줄기 세포를 도입 엽 줄기 세포로부터 유도 된 연골 세포의 형성과 관련 될 수있는 수술의 무릎 연골 손상의 회복을 촉진시킨다. 그러나 실험실 쥐에서 골 결손의 재생 재생은 세라믹 프레임 워크에 넣어 진 중간 엽 줄기 세포의 사용으로 크게 향상됩니다. 따라서, 우리는 당신이 아닌 경우 RBOK는 다음 손상된 기질 세포에서 파생 된 다른 요인, 골수의 손상 영역에서 중간 엽 전구 세포의 증식에 먼 자극 효과를 가지고 있으며, 결함 골수 조직의 영역으로의 마이그레이션을 자극한다고 가정 할 수있다. 차례로, 간질 세포는 조혈 세포와는 달리, 미세 환경에 대한 책임이 있음을 나타내는 전년도의 문헌 데이터,이 반대 마이그레이션 및 지역의 소스에서 제공 할 수 없습니다.

그럼에도 불구하고, 연구 결과 Gerasimov 유 등 (2001) 기계적 외상의 응용 프로그램이 kyuretirovannoy 뼈에서 간질 조직의뿐만 아니라 급격한 구조 조정을 야기하지만, 기질 원격 뼈에 상당한 변화 그대로, 즉, 전신 반응이 있음을 시사 국소적인 외상을위한 간질 조직. 여러 소파술 - - polytrauma을 적용 할 때 그리고이 반응은 증폭되어 운영 뼈와 골격의 먼 부분에서뿐만 아니라 림프 기관, 특히 비장뿐만 아니라 관찰된다. 골수 간질 조직과 비장의 국소적인 외상 및 다발성 외상에 대한 그러한 전신 반응의 기전은 알려지지 않았다. 이 과정은 골수강의 수질 간질 간질에 의해 방출되는 체액 성 인자의 효과와 관련이있는 것으로 추정된다. 골수 기질 세포와 비장을 만드는 가능성 콜로니 형성하는 섬유 아세포가 그들의 식민지가 골수의 단층 문화에서의 활동을 자극에 대한 데이터를 표시, 세포 증식에 대한 책임 체액 성 요인을 organonespetsificheskogo.

이와 관련하여, 그들의 유도체 골수뿐만 아니라 다른 조직뿐만 아니라 전신적으로 다시 채우기 능성 간엽 전구 세포를 투여 할 때, 즉, 유전자 치료에 특히 사용되는 것을 주목할 필요가있다. 그것은 표시되는 돌연변이 콜라겐 유전자 I 공여 세포와 야생형 생쥐의 게놈을 가진 중간 엽 줄기 세포의 대량의 정맥 투여 후 9개월를 들어, 30받는 사람의 뼈와 연골 조직에서 세포의 %, 및 IL-3 인간을 분비하는 형질 전환 된 중간 엽 줄기 마우스 셀을 교체 효과적인 면역 결핍 마우스에 인간 조혈 줄기 세포와의 동시 투여의 경우 조혈을 지원.

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간엽 줄기 세포의 유전 적 변형

유전자 변형의 추가 실험 성공은 이식 후 8주 위에 피 항 혈우병 인자 B의 외관에 리드 셀의 전송 뒤에 인간 중간 엽 줄기 세포에서 중간 엽 줄기 세포의 형질 감염 인자 IX 유전자 면역 결핍 생쥐 형질을 주목해야한다. 이 실험에서, transfection 된 세포에서 γ-glutamyl carboxylase를 사용한 factor IX의 번역 후 변형이 수행되었다. 레트로 바이러스 벡터 인코딩 인간 인자 IX와 중간 엽 줄기 세포의 형질 도입은 덜 성공적이었다 - 단지 12 일 동안, 정상적인 강도 응고 지혈을 지원 인자 IX의 치료 수준 혈우병 강아지와 함께 이러한 세포의 후속 소개.

동물의 뇌 실질에 중간 엽 줄기 세포의 이식은 공여체 미성숙 세포가 뉴런 및 신경아 교세포 모두에서 변형된다는 것을 보여 주었다. 건강한 공여자 간엽 조직의 뉴런 유도체의 생착은 이론적으로 Gauchers 질환 및 기타 지질 대사 장애, 갱글 리오 시드 또는 탄수화물 환자의 뇌 대사의 유전 적 이상을 교정 할 수 있습니다.

신경과 간 조직에서 골수 기질 전구 세포에서 줄기 세포의 실험 검색 조건의 분화를 계속. 연구원의 관심은 차별화 유도 물질과 특수 조건 매질의 조합에 초점을 맞추고있다. 특히, 10 % 소 태아 혈청 DMEM / F12 배지 (1/1)로 세척하고, 골수 간질 세포와 함께 배양으로부터 분리 200,000 / cm2의 밀도로 접종한다. 24 시간 후, 비 부착 성 세포를 제거하고, 플라스틱에 부착 된 섬유 아세포 유사 세포를 1 주 동안 배양한다. 일차 마우스 배아 섬유 아세포의 3 일 배양뿐만 아니라 배지 DMEM / F12 (1/1) 2 % 소 태아 혈청을 배양하여 수득하고 20 NG / ㎖ 또는 10-6 M에 LiF로 보충 된 배지를 사용 neuroblasts 골수 간질 세포의 분화 레티노 산 (마우스 및 인간 배아 줄기 세포의 신경 분화에 사용되는 신경 인덕터). 간세포에 선조 세포로의 골수 간질 세포의 분화는 배지, 10 % 소 태아 혈청이 보충 된 DMEM / F12 (1/1) 배아 마우스 간 세포의 초대 배양을 배양 사흘의 결과로 생성 된 컨디셔닝 된 환경을 유도 하였다.

여기에서 골수 간질의 콜로니 형성 세포는 이형이고 두 가지 유형으로 나눌 수 있음을 다시 한번 주목해야한다. 첫 번째 유형은 큰 핵과 하나 또는 두 개의 핵산이있는 섬유 아 세포를 형성하는 섬유 아세포 유사 세포를 포함합니다. 두 번째 유형은 스핀들 모양의 작은 셀로 표시됩니다. 일차 마우스 배아 섬유 아세포의 공급기 층상에서 얻어진 조건 매질 중 두 유형의 세포의 배양에서, 신경 모세포와 유사한 세포가 배양의 3 일 및 4 일째에 나타난다. 이 단계에서 그들은 종종 사상충으로 끝나는 하나 또는 두 개의 긴 과정을 가진 스핀들 모양의 형태를 가진다. 짧은 수상 돌기가있는 피라미드 형 또는 별 모양 세포는 흔하지 않습니다. 덴 드라이트 성장이 발생되는 뚜렷한 성장 콘 filopodia와 - 수지상 하나 neuroblasts 전형적인 팽창 (신장 증가율)와 말단부의 다른 분기에있다. 뉴런으로 분화하는 신경 모세포에 내재되어있는 유사한 형태 학적 징후 (신장과 원숭이를 가진 성장의 원뿔)는 신경 발생에 관한 연구에 상세히 기술되어있다. 이를 토대로 일부 연구자들은 배양 물에서 검출하는 세포가 신경 모세포라는 결론을 내렸다. 특히, 모든 Z - 및 - 4 일째 조정 배지의 교체에서 2 주 동안 배양하여 간질 세포의 초대 배양 후 Schegelskaya E. 동부 등 (2002), 미분화 상태를 유지, 증식 세포의 일부를 발견했다. 외부로, 그러한 세포는 섬유 아세포처럼 보였고, 분화하는 신경 모세포와 함께 배양 물에서 동정되었다. 대부분의 세포 (약 80 %)는 주로 신경 조직의 세포로 분화의 다른 단계에 있었고 주로 신경 세포로 분화되었다. 이 세포들의 수상 돌기 (dendritic) 과정은 서로 밀접하게 접촉하여, 긴 다세포 가닥의 형태로 신경 네트워크의 기질 부분에 서서히 세포가 형성되도록한다. 신경 모세포의 돌기 형성은 신경 세포 자체의 길이보다 8-10 배 정도 더 길었습니다. 점차적으로 피라미드 모양 세포와 별 모양 세포의 비율이 증가했습니다. 성상 세포의 수상 돌기가 분지 화되었다. 저자들에 따르면 피라미드 모양 세포와 별 모양 세포의 후기 분화는 방추형 모양 세포와 비교하여 동물에서의 정상적인 신경 발생 단계의 순서에 해당한다. 그 결과, 저자는 골수 기질 세포의 줄기 세포가 신경을 유도 노출 결론 뉴런의 세 가지 주요 유형의 체외 발생 neuroblasts에서 어떤 프로세스가있다. 2 % 태아 혈청 및 20 ng / ml LIF 배지에서 3-4 일 동안 골수 간질 세포를 배양하는 동안 신경 세포의 전임상도 검출되었다. 그러나이 경우에는 줄기 세포가 매우 천천히 나뉘어졌으며 신경 모세포의 분화는 경우의 30 %에서만 발생했으며 신경망을 형성하지 못했습니다. 성상 세포 및 희소 돌기 아교 세포 - 신경 세포의 분화 유도제 레티노 산, 신경 교세포의 우세와 신경 세포의 25 % -30 %로 배양에서 얻어진 저자로서 사용. 신경 세포는 방추형, 피라미드 형 및 별 모양의 세 가지 유형으로 모두 표현되었지만 모든 신경 세포의 3 분의 1을 차지했습니다. 추체 신경 세포의 축삭은 개별 정상 neuroontogenesis에서 수지상 공정 후에 형성 나타나는 것으로 동안 레티노 산 중간 신경 세포 배양 기질 세포의 6 번째 날에, 더 분화되었다. 성상 세포 및 희소 돌기 아교 세포와 축삭 및 수상 돌기의 성장 동안에 공급 기능을 조작 정상적인 신경 조직 형성에 필요한 myelinating : 저자들에 의하면, 신경 세포의 낮은 수율에도 불구하고, 레티노 산을 유도하는 방법은 장점을 갖는다. 따라서, 생체 내에서 손상된 사이트를 복구하려면 신경 세포가 풍부한 뉴런의 현탁액을 사용하는 것이 좋습니다.

두 번째 일련의 실험에서, 저자는 골수 간질 세포를 간 세포로 분화 유도하려고 시도했다. 마우스 배아 간세포를 배양하여 얻은 조정 배지에서 골수 기질 줄기 세포의 3 일 배양 한 후, 대형, 구형 모양의 세포는 서로 다른 크기와 종종 두 핵, 세포질 흠도 발견되었다. 이 세포들은 분화의 다른 단계에 있었고 세포질의 크기, 핵수 및 개재물의 수에 차이가 있었다. 이 세포의 대부분은 우리가 간세포 전구 세포로를 식별 한 이에 글리코겐을 감지되었습니다에서. 배양 이후에는 세포는 배아 간세포를 배양하여 수득 된 배지에서 신경 세포의 분화의 어떠한 요소도 없다하고, 반대로, 간세포의 전구 세포로 골수 간질 세포의 분화를 유도하는 인자가있다 결론이어서 neuroblasts 마찬가지로 검출되지 않았다 . 그들은 특정 조건 미디어, 인덕터에 따라 간 또는 신경 조직의 세포로 체외에서 분화로 저자는, 골수 기질에서 만능 세포의 존재를 제안한다.

일부 연구에서는 골수 간질 세포가 cardiomyocytes, 연골, 뼈 및 신경 조직 세포로 분화되는 것을 실제로 정확하게 보여줍니다. 골수 세포에는 간세포로 분화 할 수있는 줄기 세포가 있다는 정보가 있습니다. 이러한 데이터에 비추어 볼 때, 상기 실험 결과는 생쥐의 다른 조직의 세포로 분화하는 능력을 가진 다 능성 간엽 줄기 세포의 골수 내 존재에 대한 또 다른 확인으로 간주 될 수있다.

간엽 줄기 세포의 이식

인간 중간 엽 줄기 세포의 임상 이식에서 조혈 줄기 세포의 확장을 위해 사용하고 자신의 초기 후손 prekommitirovannyh 할 수 있습니다. 특히, 화학 요법 후자가 조혈 줄기 세포 및 중간 엽 줄기 세포 암 환자의 도입 말초 혈액에서 호중구 및 혈소판 회복을 하이 - 속도가 빨라집니다. 자가 및 다발성 골수종, 재생 불량성 빈혈, 자연 혈소판 감소증 치료에 사용되는 중간 엽 줄기 세포의 동종 이식 - 차 결함 조혈 간질 조직과 관련된 질병을. 위의 대부분의 경우 혈액 병리의 세포 치료의 효율성, 반면에 의한 비 선택적 파괴 지역 및 순환 암 세포에 사망자 수의 수술 후 회복 기간, 혈액의 감소, 감소를 나타내 기질 및 조혈 줄기 세포의 도입,있는 다이와 자신의 조상 조혈 환자 세포. 때문에 치료 유전자의 문화와 형질에 골수 흡인, 확장을 얻는 상대적 용이성 임상에 응용 프로그램 및 기타 분화능 중간 엽 전구 세포를 약속 엽 줄기 세포. 지방 조직 결함 능성 간엽 전구 세포 및 중간 엽 기원의 조직 장애의 전신의 지방 주입을 위해 사용 따라서 일반적인 순환으로 그 도입을 제외되지 보상한다.

해당 인수 지역, 조직 이식 및 유전자 치료를위한 중간 엽 줄기 세포의 관점은 생물학 기질 세포의 관점에서 분석하는 작품의 저자에 더 많은주의. 실제로 조혈 조직과 연관된지지 기질 - 산후 골수 전통적 구별 세포주에 두 가지 시스템으로 구성되는 본체로 여겨진다. 따라서, 골수 중간 엽 줄기 세포는 원래에만 규제 요인의 생산 조혈 미세 환경에 대한 기질 기반의 소스로 간주. 그런 다음 연구자들의 관심은 골격 조직의 줄기 원천 인 MSC의 역할을 연구하는 것으로 바뀌었다. 최신 데이터는 신경 또는 근육 조직의 형성과 골수 간질 세포의 분화의 예상치 못한 잠재력을 나타냅니다. 즉, 중간 엽 줄기 세포는 transgermalnuyu 소성을 전시 - 종류의 세포 표현형이 아닌 원래의 조직 세포로 분화 할 수있는 능력을. 그러나 골수 기질 세포의 생물학의 일부 측면은 일반적으로 생물학적 계획 불분명하고 해결되지 않은 남아 있고, 식별, 자연, 기원 및 개발과 기능 생체 내 골수 기질 세포뿐만 아니라 허용 잠재적 차별화 생체과 가능성을 포함하여 몇 가지 세부 사항에 생체 내 치료 적 사용. 중간 엽 줄기 세포의 잠재적 인 기회의 데이터뿐만 아니라, 생물학 확립 도그마와 대조적 줄기 세포의 다른 재생 가능성의 연구 결과.

저밀도 조건에서 배양 될 때, 골수 줄기 간질 세포는 각각 하나의 전구 세포의 유도체 인 별개의 콜로니를 형성한다. 식민지를 형성 할 수있는 능력으로 정의 골수 유핵 세포의 간질 세포 전구체의 비율은 크게 배양 조건 및 속하는 중간 엽 줄기 세포의 종류에 따라 달라집니다. 인간 중간 엽 줄기 세포의 효율을 형성 콜로니 피더에 독립적 인, 또는 배양 배지로부터 예를 들어, 간질 전구 세포의 최대량을 얻기 위해 쥐의 골수 세포 및 혈청 조사 피더 문화의 존재에 절대적으로 필요하다. 간질 선조 세포의 증식을 자극하는 알려진 분열 촉진 인자의 수는 제한적이다. PDGF, EGF, FGF, TGF-b 및 IGF1이 포함됩니다. 최적 조건 하에서, 가능한 흡 인물 그것을 1ml의 골수 간질 세포의 수 십억을 수신 할 수있는, 중간 엽 줄기 세포를 50 개 이상의 세포 분열을 위해 시험관 내 유지 라인 클론을 배양.

그러나, 골수 간질 세포 집단은 그 콜로니 다른 그 형성 속도가 크고 평평한 세포 섬유 아세포 같은 스핀들의 범위를 포괄 세포 형태의 다양한 크기의 변화로서 그 자체를 명확히 불균일하다. 20 일 후에 그러한 작물의 발달과 함께, 표현형의 이질성도 주목된다. 콜로니의 일부가 알칼리 포스 파타 아제의 발현이 높은 것을 특징으로하고, 다른 사람을 표현하지 않고, 세 번째 타입의 콜로니 주변에 중심 영역 및 fosfatazonegativnymi에 fosfatazopozitivnymi이다. 별도의 콜로니가 뼈 조직의 결절을 형성합니다 (매트릭스 무기화의 시작은 alizarin red 또는 Van-Koss에 의해 칼슘으로 염색 될 때 표시됩니다). 다른 콜로니에서는 지방 축적이 일어나고, 오일 레드로 G- 염색으로 확인됩니다. 간엽 줄기 세포의 콜로니는 알 시안 블루 (alcyan blue)로 채색 된 연골을 형성하는 경우가 적습니다.

실험 동물에서 자궁외 이식 후 클론 MGK 라인은 연골 조직으로뿐만 아니라,하지만 거의 myelopoiesis 및 지방 세포와 관련된 setchatoobraznoy와 자궁외 뼈 기질을 형성하지 않는다. 조혈 및 혈관계의 세포주가 수신자로부터 유도되는 반면, 새로이 형성되는 골조직이 골 세포로 구성되는 것을 특징이 경우 키메라의 골수 간질 세포의 클론 라인 이식에서, 지방 세포, 기질 및 도너 기원을 포함한다.

이 연구의 결과는 간질 골수 전구체의 줄기 특성을 확인하고, 그로부터 클론 혈구를 얻었다. 그들은 또한 배양 세포에서의 모든 복제가 실제로 다 능성 줄기 세포가 아니라는 것을 동시에 보여줍니다. 개별 클론의 차별화의 진정한 잠재력에 대한 가장 정확한 정보는 이식 후가 아니라 체외에서의 파생 상품의 표현형을 결정함으로써 생체 내에서 얻을 수있는 것을, 일부 연구자들은 믿고, 우리는 그들의 의견을 공유 할 수 있습니다. Osteo- 배양 표현형 마커를 발현 hondro- 또는 지방 조직 (조직 화학적 기법으로 mRNA를 통해 또는 결정), 심지어 광물 매트릭스의 제조는 생체 내에서 단일 클론 능성의 정도를 반영하지 않는다. 따라서 간질 세포군에서 줄기 세포의 동정은 생물학적 이식 시험의 적절한 조건 하에서 사후에서만 가능하다. 연골의 형성은 확산 실이나 체외 간질 세포 mikromassnyh 문화 폐쇄계에서 흔한 반면 특히, 아주 드물게 이식 개방 시스템에서 관찰되지 연골 로컬 저산소 장력을 달성하며, 연골의 형성에 기여한다. 따라서 이식 기술과 비특이적 시험 관내 배양 조건조차도 MSC 분화의 범위에 큰 영향을 미친다.

주어진 실험 조건을 준수한 실험적 이식은 골수 간질 세포의 분화 가능성과 적절한 확인의 핵심 요소를 결정하는 황금 표준입니다. 역사적으로 골수 간질 골수 이식 연구는 일반적인 골수 이식 문제와 관련이 있습니다. 조혈 모세포 간질 세포의 이식으로 조혈 환경이 형성되고 이식 부위에서 조혈 조직의 이소성 발달을 유도한다는 것이 확인되었다. 기증자의 조그만 환경과 조혈 조직의 기원은 우리가 이소성 뼈를 진정한 "거꾸로 된"골수 이식으로 치료할 수있게 해줍니다. 골수 간질 세포의 국소 이식은 자발적인 회복 재생보다 더 뚜렷한 골 결손의 효과적인 교정을 촉진합니다. 동물 모델에서 여러 임상 연구에서 설득력도 간단한 경우에이 방법을 최적화 할 수 있지만, 정형 외과에서 골수 기질 세포의 이식의 가능성을 입증 가장주의 작업과 분석을 필요로한다. 조골 세포 간질 세포가 아직 설정되지 않은 팽창 생체 특히, 최적의 조건에서 더 배기 구조물 및 조성물은 적합한 담체와 골 부피 재생에 필요한 세포의 수는 없다.

간엽 기원 정통 연성 MSC의 조직 재생 용 전파 생체 골수 간질 세포를 적용 할 수있을뿐만 아니라 신경 세포의 재생 또는 CNS의 유전자 산물의 전달을위한 잠재적 인 사용을 연다. 원칙적으로 이것은 인간으로부터자가 신경 줄기 세포를 얻을 필요가 없으므로 신경계가 패배하여 세포 치료를 단순화합니다. 그것은 진정으로 기질과 외인성 기원으로 cardiomyocytes과 근원 전구체 세포의 생성을위한 골수 세포를 사용하는 가능성에 대해보고됩니다.

일반적인 골격 질환 치료를위한 골수 간질 세포의 전신 이식 수술에 대한 실험이 진행 중입니다. 골수 기질 세포가 아니라 실험 동물에서 병리학 뼈 조직의 형성을 유도하는 세포의 유전 정보를 사용하여 벡터 송금으로 예시되어 골격의 질환 유전 질환에 대한 책임 인구 것을 의심의 여지가. 그러나, 일반적인 혈류로 도입 된 후 골격의 뼈에서 이식, 성장, 증식 및 분화하는 간질 세포의 능력은 아직 입증되지 않았습니다.

이 골수 기질의 표준 절차가 성공적으로 생착을 평가, 조혈 조직에 매우 엄격한 기준을 이식되지 않는다는 사실에 부분적으로 기인 체계적으로 간질 세포가 개발 될 아직 관리. 조직 추출물에서의 마커 유전자의 존재 또는 기증자 기원 세포의 배양에서의 분리는 세포의 생장에 관한 것이 아니라 그들의 생존만을 나타낸다는 것을 기억해야한다. 마우스 사지에서 골수 기질 세포 심지어 동맥 내 주입 기증자 유래 세포는 미세 혈관 골수 네트워크 내에서 많은 수에서 발견된다는 사실에도 불구하고, 사실상 제로 결과 생착 될 수 있습니다. 불행히도, 이러한 세포는 ex vivo 배양 조건 하에서 마커 공여체 유전자를 측정 한 결과에 기초하여 "이식 된"것으로 보통 기술된다. 또한, 기증자 기원의 분화되고 기능적으로 활성 인 세포의 조직에서 장기간의 통합에 대한 확실한 증거를 제공 할 필요가있다. 골격 내에서 골수 간질 세포의 생착에 대해보고 된 많은 저서들에서 이러한 종류의 명확한 자료가 부족하다는 사실은 놀랍습니다. 그럼에도 불구하고, 동물에 대한 올바른 실험에서, 전신 투여 후에 간질 선조 세포의 제한적이지만 실제적인 이식이 확립되었다는 것을 주목해야한다.

이 데이터는 근원적 인 골수 전구 세포를 혈관 시스템을 통해 근육에 전달할 가능성을 연구 한 결과와 일치합니다. 그러나 혈액 순환을 포함하지 않는 이동 과정을 사용하는 혈관 외 세포 운동에 기초하여 성장과 성장 과정에서 골격과 근육 조직이 형성된다는 사실을 잊어서는 안됩니다. 선조 세포를 고상 조직으로 전달하기위한 독립적 인 순환 경로가 실제로 존재한다면 생리 학적으로 순환하는 중간 엽 전구 세포의 존재를 허용 할 수 있는가? 개발중인 생물체와 출생 후의 생물체에서이 세포의 기원은 무엇이며, 어떻게 이들이 혈관 벽을 관통합니까? 이러한 문제의 해결책은 절대적으로 필요하며 가장 철저한 전임상 분석이 필요합니다. 이러한 질문에 대한 답변이 발견 된 후에도 골격 성장 및 결합 조직의 재 형성과 관련된 문제의 운동 학적 측면은 아직 해결되지 않았습니다. 동시에 돌연변이 된 골격 선조 세포의 전체 개체군을 건강한 간질 세포로 대체하여 골 형성 장애를 치료하는 것이 실제 임상 적 관점으로 보입니다. 이 경우, 생체 외 간질 줄기 세포를 배양함으로써 병적 인 골 형성에 의한 골절 또는 변형의 국부적 인 영역과 골조직의 파괴적인 변화를 교정 할 수 있습니다. 따라서 앞으로의 연구 방향은 생체 외 돌연변이 된 골 형성 선조 세포의 형질 전환 또는 유전 적 교정의 문제에 초점을 맞추어야한다.

단기간 또는 영구적 인 세포의 유전 공학은 생체 내 및 생체 내에서 세포 신진 대사에서 개별 단백질의 역할에 관한 많은 과학적 발견의 원천 인 세포 및 분자 생물학의 기초가되었습니다. 간질 골수 줄기 세포의 특성은 골격의 유전 질환의 교정을위한 독특한 회로 이식을 개발 할 수 있기 때문에 유전 질환과 인간의 질병을 해결하는 분자 기술의 사용은, 실제 의학 매우 유망하다. 이 경우, 중간 엽 줄기 세포는 미래의 수령인에게서 쉽게 얻을 수 있으며, 유전자 조작이 가능하고 단기간에 대량으로 번식 할 수 있습니다. 중간 엽 줄기 세포의 사용은 vtruvous vector 구조를 통해 유전 정보 물질을 환자에게 직접 전달하는 것과 관련된 제한과 위험을 피한다. 이러한 전략은 배아 줄기 세포에 적용 할 수 있지만자가 면역 출생 후의 골수 기질 세포는 가능한 면역 학적 이식 후 합병증을 배제하기 때문에보다 선호되는 물질입니다. 골 재생을 촉진하기 위해 예를 들어, 단기 효과를 달성하기 위해, 최적의 방법은 중간 엽 elektroporatsrsh를 이용하여 줄기 세포 화학 융합, 리포 펙션, 플라스미드 및 아데노 바이러스 작 제물의 유전 적 변형이다. 특히, 골수 간질 BMP-2 세포로의 바이러스 형질 전환은 실험적 다발성 흉부 외상에서 뼈의 재생을 촉진하는데 효과적이었다. 아데노 바이러스 벡터 구조의 생성은 독성이 없기 때문에 바람직하다. 그러나,이 경우 골수 간질 세포의 유전자 변형은 매우 낮은 안정성을 특징으로합니다. 또한 정상적인 형질 전환 된 골수 간질 세포는 다른 세포 유형보다 10 배 더 많은 유전 정보의 벡터 운반체를 사용해야하며, 이는 감염된 세포의 사망률을 현저히 증가시킵니다.

특정 유전자가 아데노 - 관련 바이러스, 레트로 바이러스, 렌티 바이러스 및 아데노 - 레트로 바이러스 키메라의 사용을 필요로하는 중간 엽 줄기 세포의 필요한 장기 또는 영구 변형, 낮은 또는 제로 생물학적 활성에 의한 유전병 치료. 이 바이러스의 수송 사이트는 큰 DNA 트랜 스펙 션 (최대 8kb)을 운반 할 수 있습니다. 과학 문헌 이미 외인성 골수 간질 레트로 바이러스 작 제물 규제 분자의 합성을 암호화하는 형질 세포 마커의 생물학적 활성에 대한 정보가 나타났다 - IL-3, CD2, 인자 VIII, 및 L-DOPA의 합성에 관여하는 효소. 그러나이 연구에서 저자는이 기술의 실제 적용이 시작되기 전에 극복해야 할 많은 한계점을 지적합니다. 첫 번째 문제는 MCK ex vivo 수정 과정을 최적화하는 것입니다. 생체 외 (in vitro)에서 골수 기질 세포의 증식 (3-4 주)이 그들의 형질 감염을 감소시키는 것으로 알려져 있습니다. 동시에, MSCs의 높은 수준의 유전자 변형을 달성하기 위해서는 수 차례의 수혈주기가 필요합니다. 두 번째 문제는 아직 4 개월을 넘지 않는 치료 유전자의 발현 지속 기간과 관련이있다. 효과적인 유전자 발현의 자연적인 감소는 프로모터의 불 활성화 및 변형 된 세포의 죽음에 기인한다. 중간 엽 줄기 세포를 이용하여 유전 정보의 일반 잠재 전송에 예비 연구 결과는 오른쪽 방향의 생물학적 활성을 조절하기에 적절한 프로모터를 선택하는 형질 전환 방법 생체의 추가적인 최적화를위한 필요성을 나타내고, 행의 변형 골수 간질 세포의 능력 향상 이식 후에 생체 내에서 자기 갱신. 골수 간질 세포를 올바른 방향으로 변형시키기위한 레트로 바이러스 디자인의 사용은 필수적으로 생식을 요구하지 않는다는 점에 유의해야합니다. 형질 전환 된 중간 엽 줄기 세포는 안정한 거주 및 결합 조직에서 강제적 인 물리적 인 통합 및 기능없이 배경에 대한 교정 기능을 수행 할 수있다. 이 경우 생체 내 요인을 생성하는 생물학적 미니 펌프로 간주되어야하며, 그 적자는 유전 병리 현상의 징후를 결정합니다.

이 경우에는 왜곡 유전 정보의 전송 또는 판매를 차단하는 것이 필요하기 때문에 유전자 비정상 병리학 생물학적 활성의 발현을 특징으로 우성 유전 질환의 치료를위한 변형 골수 간질 세포의 사용은 훨씬 더 문제가된다. 유전 공학의 방법 중 하나 - 배아 줄기 세포의 상동 재조합 형질 전환 동물을 생성합니다. 그러나, 식별, 분리 및 재조합의 확장의 문제와 함께 동종 재조합의 매우 낮은 수준, 가까운 장래에이 기술의 광범위한 사용을 촉진하지 않을 경우에도 새로운 기술 방법을 개발하는 경우. 유전자 돌연변이는 목적하는 순서 (짧은 DNA 올리고 뉴클레오티드, 또는 키 메릭 RNA / DNA 올리고 뉴클레오티드) 손상된 게놈 상 동체에 결합하는와 외래 DNA의 도입에 의해 정정 될 수 있으므로 유전자 치료에 두 번째 방법은 손상된 DNA의 지배적 병리학 자동 수정에 기초한다. 제 3 실시 예는 전사의 가능성을 배제 삼원 나선 구조를 형성하고, 특정 유전자에 결합 설계된 올리고 뉴클레오티드의 사용을 통해 달성된다 병리학 정보 송신 로크를 제공한다.

염색체 수준에서의 유전자 질환의 보정이 최적의 바람직한 치료 방법이지만, 또한 mRNA의 도미넌트 네거티브 유전자를 차단하는 유망한 벡터 (아마도 더 많은 액세스)이다. 번역 및 / 또는 증가 mRNA의 분해를 억제하기 위하여 긴 단백질 분자 안티센스 올리고 뉴클레오티드 서열 또는 세포의 mRNA의 생합성에있어서의 결합 전체 차단에 사용되어왔다. 또한, 이중 가닥 RNA는 mRNA의 급속한 분해를 유도하며 그 메커니즘은 불명확하다. 그러나, 단 변이 또는 단일 변이를 갖는 돌연변이 대립 유전자로부터 전사 된 mRNA의 단순한 제거가 정상 대립 유전자의 발현을 촉진 할 것 같지는 않다. 대안은 해마 머리 리보솜과 머리핀의 사용으로, mRNA의 고도로 특이적인 영역에 결합 할 수 있으며 번역 도중 절단 및 불 활성화를 유도 할 수 있습니다. 현재,이 방법을 병리학 적 골 형성의 치료에 사용할 가능성이 연구되고있다. 에 관계없이 정확히 목표 무엇인지 - 새로운 유전자 치료 기술의 게놈 또는 세포질 요소의 성공 골수 기질 세포 생체 외에서, 특정 벡터와 생체 내에서 원하는 요소를 표현하는 중간 엽 줄기 세포의 안정 기능의 최적의 선택에 시약을 포함 효율에 의해 결정됩니다.

따라서 예상치 못한 특성을 가진 중간 엽 줄기 세포의 발견은 세포주의 개발을위한 새로운 개념적 계획을 창출한다. 그러나 기질 줄기 세포의 생물학적 역할을 이해하고, 자신의 성격, 분화 또는 탈분화하는 능력은 자신의 생리 학적 배아 발달, 출생 후 성장, 성숙 및 노화의 과정에서 중요성뿐만 아니라, 인간의 질병에 더 학제 간 연구를 필요로한다.