세포 이식의 한계, 위험 및 합병증

플라스틱 재생 의학이 손상된 조직 및 인간 환자의 장기를 다시 채우기 소정의 세포주를 생성하는 시험 관내 및 생체 내에서 허용 클리닉 및 toti- 특성 능성 배아 줄기 세포 및 선조 세포의 실현에 기초한다.

치료 배아 줄기 세포의 사용과 명확한 조직 줄기 세포에 대한 진정한 기회 ( "성인"소위는 줄기 세포 없다 - 성체 줄기 세포)를 사람이 의심 더 이상이다. 그러나 미국 국립 의학 아카데미 (USA)의 전문가들은 실험에서 줄기 세포의 특성을보다 자세하게 연구 할 것을 권고한다 적절한 생물학적 모델을 사용하고 이식의 모든 결과를 객관적으로 평가 한 다음에만 줄기 세포를 사용하십시오.

줄기 세포가 세 가지 배아 전단지의 조직 유도체의 일부라는 것이 입증되었습니다. 줄기 세포가 혈관, 망막, 각막, 피부, 표피, 골수와 말초 혈액에서 발견되는, 치아의 펄프, 신장, 소화 기관, 췌장과 간의 상피. 현대적인 방법의 도움으로 줄기 신경 세포가 성인 뇌 및 척수에 국한되어 있음이 입증되었습니다. 이 감각적 인 데이터는 과학자와 미디어의 특별한 관심을 끌었습니다. 뇌의 뉴런은 회복되지 않는 정적 인 세포 집단의 전형적인 예 였기 때문입니다. 인간과 동물의 뇌에서 생성 신경 세포, 성상 세포 및 희소 돌기 아교 세포에서 신경 줄기 세포에 ontogenesis 인해 모두 초기와 후기 기간 (줄기 세포 : 건강 미국의 과학 발전과 미래 연구 방향 냇 INST ..).

그러나 정상적인 조건에서 최종 조직의 줄기 세포의 소성은 나타나지 않습니다. 최종 조직의 줄기 세포의 소성 잠재력을 확인하려면 반드시 분리해야하며 사이토 카인 (LIF, EGF, FGF)이 포함 된 배지에서 배양해야합니다. 또한, 줄기 세포 유도체는 우울한 면역계 (γ- 조사, 세포 분열 촉진제, 부 술판 등)가있는 동물의 몸에 이식 된 경우에만 성공적으로 생존합니다. 지금까지 조사되지 않았거나 깊은 면역 억제에 노출 된 동물에서 줄기 세포 가소성의 확실한 증거는 없습니다.

이러한 상황에서, 위험한 효능은 주로 자신의 PGC 이소성 이식 영역에 나타나있다 - 피하 주사 ESK 면역 결핍 마우스를 주사 부위에서 형성 기형 암종. 또한, 동물의 배아에 비해 염색체 이상 인간의 배아 발달 주파수 중. 포배기에서 인간 배아의 20-25 %가 정상 핵형을 가진 세포로 구성되고, 시험관 내 수정 후의 초기 인간 배아의 대다수에서 염색체 모자이 혼란 매우 빈번한 수치 구조적 수차를 검출.

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줄기 세포의 유익한 효과

임상 시험의 예비 결과는 환자에게 줄기 세포의 유익한 효과를 확인하지만 지금까지 세포 이식의 장기적인 결과에 대한 정보는 없습니다. 문헌에서 처음 파킨슨 병에서 배아의 골수 조각의 이식의 긍정적 인 결과의보고에 의해 지배,하지만 환자의 뇌에 이식 배아 또는 태아의 신경 조직의 효과적인 치료 효과를 부정하는 데이터를 표시하기 시작했다.

XX 세기의 한가운데에 조혈의 회복이 먼저 골수 세포의 정맥 수혈 후 치명적으로 조사 된 동물에서 발견되었고, 1969 년 미국의 연구자 D. 토마스는 처음 골수 이식 남자를 시행 하였다. 인한 높은 사망률 동안 잦은 neprizhivleniya 이식 및 개발 반응 "호스트 이식편 대"에 대한 면역 학적 호환성 골수 기증자의 메커니즘에 대한 지식과받는 사람의 부족. 인간 백혈구 항원 (HBA), 및 가능 크게 종양학 및 혈액학에서 치료 확산이 방법되었다 골수 이식 후 생존율을 증가시키는 입력 방법의 개선으로 구성되는 주 조직 적합성 복합체의 발견. 10 년 후, 말초 혈액으로부터 얻은 조혈 모세포 (hematopoietic stem cells, HSC)의 백혈구 제거 (leukapheresis)의 도움으로 이식 수술을 수행 하였다. 1988 년 프랑스에서 처음 제대혈을 사용 조혈 모세포 소스, 그리고 언론에서 2000 년 말과 같은 판 코니 빈혈을 가진 아이의 치료를 위해 잠재적으로 임상 적용의 범위를 확장 다양한 조직 유형의 세포로 분화하는 조혈 모세포의 기능에 대해 나타나기 시작했다. 그러나 이식 재료는 GSK와 함께 다양한 성격과 특성을 가진 비 - 조혈 세포를 포함하고 있음이 밝혀졌습니다. 이와 관련하여, 이식편을 정제하는 방법 및 세포 순도를 평가하기위한 기준이 개발되고있다. 특히, CD34 + 세포의 양성 면역 절편을 사용하여 단일 클론 항체의 도움으로 HSC를 단리 할 수 있습니다.

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줄기 세포 치료의 합병증

골수 이식의 합병증은 가장 흔히 혈액 학적이며 장기간의 혈소판 감소증과 관련이 있습니다. 가장 흔한 감염은 빈혈, 빈혈 및 출혈입니다. 이와 관련하여 조혈의 신속하고 안정적인 회복을 보장하는 줄기 세포의 최대한 보존을 위해 골수를 샘플링, 처리 및 저장하는 최적의 모드를 선택하는 것이 매우 중요합니다. 다음과 같은 파라미터를 평가하기 위해 취해지는 그래프트 특성화 지금이다 단핵구 및 / 또는 유핵 세포의 수 및 집락 형성 단위 함량 SB34 양성 세포. 불행하게도,이 지표들은 줄기 세포 이식 인구의 실제 조혈 능력에 대한 간접적 인 추정만을 제공합니다. 현재, 심지어자가 골수 이식 환자에서 조혈 장기 복구를 위해 이식의 충분 성을 결정하는 절대적으로 정확한 매개 변수가있다. 엄격한 처리 표준, 저온 보존 및 이식편 검사가 없기 때문에 공통 기준 개발이 매우 어렵습니다. 또한 각 환자의 성공적인 조혈 복구에 영향을 미치는 다양한 요인을 고려해야합니다. 자가 골수 이식에서는 이들 중 가장 중요한 것은 이전 요법의 수, 특히 조절식이 요법, 이식 후 기간의 요인을 자극 골수 수집 방식 응용 프로그램의 식민지에서 생산되는 질병의 기간입니다. 또한, 태아 이식술 이전의 화학 요법이 골수 줄기 세포에 부정적인 영향을 줄 수 있다는 사실을 잊어서는 안됩니다.

동종 골수 이식으로 중증 독성 합병증의 발생률이 크게 증가합니다. 이와 관련하여 서어 중 혈증에서 동종 골수 이식에 대한 통계 데이터가 중요합니다. European Bone Marrow Transplantation Group의 보고서에 따르면, 대규모의 지중해 증후군 환자에서 약 800 건의 골수 이식이 기록되었습니다. 심각한 합병증 부분적 호환 관련 또는 무관 도너 유사한 줄기 세포 이식 재료의 높은 사망률과 연관된 HLA-동일한 형제에서 수행 대부분의 지중해 빈혈의 동종 이식. 치명적인 전염성 합병증의 위험을 최소화하기 위해 환자는 층류의 공기가있는 격리 된 무균 상자에 넣고 저지방 또는 박테리아식이 요법을받습니다. 장내 세균 오염 제거를 위해 비 흡수성 형태의 항생제, 항진균제를 처방합니다. 정맥 내 amphotericin B의 예방을 위해 전신 감염 예방은 이식 전날 처방 된 amikacin과 ceftazidime으로 고정시키고 환자가 퇴원 할 때까지 계속 치료한다. 조사 전의 모든 혈액 제제는 30 Gy의 선량으로 조사된다. 이식시 비경 구 영양은 전제 조건이며 음식의 섭취를 자연적으로 제한함으로써 즉시 시작됩니다.

많은 합병증은 구역질, 구토 및 점막염, 신장 손상 및 간질 성 폐렴을 일으키는 면역 억제 약물의 높은 독성과 관련이 있습니다. 화학 요법의 가장 심각한 합병증 중 하나는 간세포 폐색 성 질환으로 초기 이식 후 사망합니다. 간장의 포털 시스템의 정맥 혈전증의 위험 요인 중 환자의 나이, 간염 및 간 섬유화, 골수 이식 후 면역 억제 치료를 채의 존재에 주목해야한다. Veno-occlusive disease는 간세포에서 특히 위험합니다. 간세포는 간염, 간염, 섬유화 - 수혈 요법의 빈번한 인공 위성을 동반합니다. 간장의 포털 시스템의 정맥 혈전증은 이식 후 1~2주 내에서 개발 및 상복부 혈액 빌리루빈 및 트랜스 아미나 제, 진보적 인 간 비대, 복수, 뇌 질환, 통증의 급격한 증가에 의해 특징입니다. 조직 학적 부검 물질은 내피 손상, 피하 출혈, 병변 tsentrolobulyarnyh 간세포, 혈전 성 폐색 간 정맥과 중심 정맥에 정의. 지중해 증 환자의 경우 세포 성 면역 결핍증의 독성 영향과 관련된 치명적인 심장 마비 사례가 설명되었습니다.

이식 수술을 준비 할 때 cyclophosphamide와 busulfan은 유독성 출혈성 방광염을 유발하여 상피 세포의 병리학 적 변화를 일으킨다. 골수 이식에서 사이클로스포린 A의 사용은 자주 신 독성 및 신경 독성, 고혈압 증후군, 유체 보존 및 세포 장애 간세포의 효과를 동반한다. 여성에서는 성기능 및 생식 기능의 침해가 더 자주 관찰됩니다. 이식 후 어린 아이들에게서 사춘기 발달은 대개 고통을 겪지 않지만, 나이가 든 아이들에서는 생식기 구체의 발달 과정이 매우 심각 할 수 있습니다. 이식 자체와 직접 관련이있는 합병증에는 동종 골수 세포 거부, ABO 시스템의 부적합, 급성 및 만성 형태의 이식편 대 숙주 반응이 포함됩니다.

연장 용혈 및 수혈의 필요성의 급격한 증가로 이어질 수 이식 후 3백30~6백5일 내에서 생산 된 이식 ABO 호환되지 않는 골수 idioagglutinin 유형 "기증자 ABO에 대한 호스트", 후 환자에게. 상기 합병증은 비장 절제술을 수행해야 보정 환자의 수가 0 만 이식 후 적혈구 수혈 그룹으로자가 면역 호중구 감소증, 혈소판 감소증, 범 혈구 감소증을 억제하거나한다.

급성 반응받는 35~40%에서 "호스트 이식편 대는"동종 헤모글로빈 동일한 골수 이식 후 백일 이내에 개발하고 있습니다. 피부 병변, 간, 창자의 정도는 발진, 황달, 설사 가벼운 피부 박리에, 장폐색, 급성 간부전 다르다. 11-53% - 골수 이식 후 I 범위 지중해 빈혈 주파수 급성 반응 "이식편 대 숙주"환자, II 이상 75 % 정도이다. 전신 다발성 장기 증후군과 같은 만성 반응 "호스트 이식편 대는"일반적으로 환자의 30-50 %를 동종 골수 이식 후 1백~5백일 내에서 개발하고 있습니다. 피부, 입, 간, 눈, 식도 및 상부기도가 영향을받습니다. 만성 반응 "호스트 이식편 대"의 제한된 형태를 구별 할 때 만성 공격적 간염, 눈 질환, 침샘이나 다른 기관과 함께 영향을받는 피부 및 / 또는 간, 및 확산, 일반화 된 피부 병변. 사망 원인은 종종 심각한 면역 결핍으로 인한 전염성 합병증입니다. 3 % 심각한 - - 반응 "호스트 이식편 대"의 지중해 빈혈 만성 경증에서 중등도, 12 %에서 발견되었다 HLA-호환 동종 골수의 수신자의 0.9 %를 가지고있다. 골수 이식에 심각한 합병증은 수술 후 50-130 일이 경과되는 이식 거부입니다. 거부 빈도는 조절 모드에 따라 다릅니다. 특히, 지중해 빈혈 환자 혼자서 메토트렉세이트의 제조 동안 처리 된 골수 이식의 거부 반응의 경우 26 %에서 관찰되어, 시클로 스포린 A의 메토트렉세이트의 조합 - 9 %, 오직 사이클로스포린 할당 할 때 - (경우 8 % Haziyev 등 ., 1995).

바이러스, 박테리아 및 곰팡이에 의한 골수 이식 후 감염성 합병증. 이들의 개발은, cytostatics는 점막 장벽과 반응 "호스트 이식편 대를"패배 화학 요법 조절하는 동안 유도 깊은 호중구 감소증과 연결되어 있습니다. 개발의 시간에 따라 감염의 세 단계가 있습니다. 염증 및 그람 음성 박테리아, 칸디다 곰팡이 - 점막 장벽 및 호중구 감소증 손상에 의해 지배되는 첫 번째 단계 (첫 번째 개월 후 이식에 개발)에서, 종종 바이러스 감염 (헤르페스, 엡스타인 - 바 바이러스, 거대 세포 바이러스, 수두 대상 포진)뿐만 아니라 감염 grampolozhi에 의한 동반 , aspergillomas. 초기 이식 후 기간 (두 번째와 세 번째 달 이식 후)에서 종종 감염의 두 번째 단계에서 환자의 죽음으로 인도하는 가장 심각한 거대 세포 바이러스 감염이다. 골수 이식 후 지중해 빈혈 거대 세포 바이러스 감염은 수신자의 1.7-4.4 %에서 발생합니다. 세 번째 단계 (3 개월 운전 후) 늦은 이식 후 시간에서 관찰되고, 중증 복합 면역 결핍을 특징으로한다. 이 기간은 일반적으로 수두 구균, 주폐 카리니, 나이 세리아 메닝 기티 디스, 헤 모필 러스 인플루엔자 및 hepatotropic 바이러스에 의한 감염을 알 수있다. 골수 이식 후 환자의 지중해 빈혈 사망률은 세균 및 진균 패혈증, 특발성 간질 및 거대 세포 바이러스 폐렴, 급성 호흡 곤란 증후군, 급성 심부전, 심장 압전, 뇌출혈, venookklyuzionnoy 간 질환과 급성 반응 "호스트 이식편 대"와 연결되어 있습니다.

현재, 골수에서 줄기 조혈 세포의 순수한 개체군을 분리하는 방법을 개발하는 과정에서 일정한 진전이 있었다. 탯줄에서 태아의 혈액을 채취하는 기술이 향상되었으며 제대혈에서 혈액 생성 세포를 분리하는 방법이 개발되었습니다. 과학 언론에 따르면 사이토 카인이있는 배지에서 배양 된 경우 조혈 줄기 세포가 증식 할 수 있다는보고가 있습니다. HSC의 확장을 위해 특별히 고안된 생물 반응기를 사용하면 골수, 말초 혈액 또는 제대혈에서 분리 된 줄기 조혈 세포의 바이오 매스가 상당히 증가합니다. HSC 확장의 가능성은 세포 이식의 임상 개발에서 중요한 단계입니다.

그러나 체외에서 HSC를 번식시키기 전에 조혈 줄기 세포의 동질 집단을 분리 할 필요가있다. 이것은 일반적으로 선택적 공유 자기 또는 형광 표지 HSC에 연결된 모노클로 날 항체를 표시하고, 적절한 셀 소터 그들을 선택할 수있는 마커를 사용하여 달성된다. 동시에 조혈 줄기 세포의 표현형 특성에 대한 문제는 최종적으로 해결되지 않았다. A. 페트 렌코., GSK 후보는 CD34, AC133 및로 메틸 항원없이 CD38, HLA-DR 및 분화의 다른 마커 (표현형 CD34 + Liir 셀들)의 표면 상에 존재하는 세포를 처리로서 V. Hryschenko (2003). 선형 분화 마커 (계통 린)에서 (GPA), CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20 (MUENCH, 2001), 글리코 포린 A를 포함한다. / 낮은 이식을위한 표현형 CD34 + CD71low CD45RalüW 셀들뿐만 아니라 CD34 + + CD38low로 메틸 / C-KIT 유망한 것으로 간주된다.

효과적인 이식을 위해 충분한 HSC의 수의 문제는 여전히 문제입니다. 현재 줄기 세포 형성 세포의 원천은 골수, 말초 혈액, 제대혈뿐 아니라 배아 간입니다. 줄기 조혈 세포의 팽창은 내피 세포와 조혈 성장 인자의 존재 하에서 배양함으로써 달성된다. 다양한 프로토콜에서 골수 단백, SCF, 에리스로포이에틴, 인슐린 유사 성장 인자, 코르티코 스테로이드 및 에스트로겐을 사용하여 HSC의 증식을 유도합니다. 사이토 카인의 조합을 시험관 내에서 사용하는 경우, 배양 2 주째가 끝날 때 HSC 풀의 유의 한 증가를 얻을 수있다.

전통적으로 HSC 제대혈은 주로 hemoblastoses에 사용됩니다. 그러나, 제대혈 세포의 성공적인 이식에 필요한 조혈 세포의 최소 투여 량은 수혜자 체중 1kg 당 3.7 × 107 ^개의 핵형 세포이다. 소량의 HSC를 사용하면 이식 실패 및 재발 위험이 상당히 증가합니다. 따라서, 제대혈의 혈액 형성 세포의 이식은 주로 어린이의 혈흉증 치료에 사용됩니다.

불행하게도, 여전히 표준 빈 없으며, 제대혈 조혈 세포의 표준화 된 프로토콜 임상 사용. 따라서 자체는 제대혈의 세포가 법적으로 이식 조혈 줄기 세포의 원천으로 인식되지 않습니다 줄기. 또한, 해외에서 사용할 수 제대 krovb의 은행의 활동과 조직을 관리하는 더 윤리적 또는 법적 규정이 없다. 한편, 제대혈 이식의 안전을 위해, 모든 샘플은주의 깊게 관찰해야한다. 임신 한 여자의 시작 부분에 혈액 샘플링 이전은 그녀의 동의를 얻어야합니다. 각 임신이 된 HBsAg의 캐리지에 검사해야, C 형 간염 바이러스, HIV, 매독 항체. 제대혈의 각 샘플 유핵 세포와 CD34 + 콜로니 형성 능력의 표준 수에 테스트해야합니다. 또한, 당화 타이핑, 혈액형 ABO 및 Rh를 계수의 회원 자격을 실시했다. 시험 절차는, HIV-1과 HIV-2 감염 된 HBsAg, C 형 간염 바이러스, 거대 세포 바이러스 감염 NTLY NTLY-1-II, 매독, 톡소 플라스마 증을 세균 무균, 혈청 학적 검사에 작물이 필요합니다. 또한, 사이토 메갈로 바이러스 및 HIV 폴리머 라제 연쇄 반응의 검출을 행한다. 여기에는 브루 턴, 질병 Harlera과 삿대를 젓는 agammaglobulinemia 지중해 빈혈 및 겸상 적혈구 빈혈, 아데노신 데 아미나 결핍과 같은 유전 질환을 식별하는 프로토콜 테스트 제대혈 조혈 모세포 분석을 보완하기 위해 적절한 것 같다.

이식 준비의 다음 단계에서 GSK의 보존 문제가 발생합니다. 세포를 준비 할 때 세포의 생존 가능성에 가장 위험한 것은 동결 및 해동 과정입니다. 조혈 세포를 동결시키는 경우 결정의 형성으로 인해 상당 부분이 파괴 될 수 있습니다. 세포 사멸의 비율을 줄이기 위해 특수 물질 - 동결 방지제가 사용됩니다. 대부분의 경우, 동결 방지제로서 DMSO가 최종 농도 10 %로 사용됩니다. 그러나, DMSO의 경우,이 농도는 직접적인 세포 독성 효과에 의해 특징 지어지며, 이는 최소 노출 조건 하에서조차도 나타납니다. 동안 강성 제로 온도 노출 모드 및 규제 준수 처리 재료를 유지함으로써 및 (모든 조작 속도 복수 세탁 방법을 적용하는)을 달성 해동 후, 세포 독성 효과를 감소시켰다. DMSO 농도를 5 % 미만으로 적용하지 마십시오.이 경우에는 조혈 세포의 대량 죽음이 동결 기간 중에 발생하기 때문입니다.

현탁액 혼합물 GSK에서 적혈구 불순물이 존재하면 적혈구 항원에 대한 비 호환성 반응이 발생할 위험이 있습니다. 동시에, 적혈구의 제거와 함께, 조혈 세포의 손실이 현저하게 증가한다. 이와 관련하여, GCS의 미분 획 분리 방법이 제안되었다. 이 경우, 10 % DMSO 용액과 -80 ° C로 일정한 속도로 냉각 (-80 ° C)하여 저온의 손상 효과로부터 유 핵화 된 세포를 보호 한 후 세포 현탁액을 액체 질소에서 동결시킵니다. 이 동결 보존 기법을 사용하면 적혈구가 부분적으로 분해되므로 혈액 샘플에는 분획이 필요하지 않습니다. 이식 전에 세포 현탁액을 해동하고 인간 알부민 또는 혈장 용액에서 헤모글로빈 및 DMSO가 제거되도록 씻어 낸다. 이 방법을 사용하여 조혈 전구의 보존 제대혈 분류 후보다 실제로 더 높은이지만, 저장 적혈구의 ABO 호환되지 않는 수혈 수혈로 인한 합병증의 위험이 있습니다.

HSC 시료 및 HSC 시료의 보관을위한 은행 시스템을 구축하면 위의 문제를 해결할 수 있습니다. 그러나이를 위해서 윤리적 및 법적 규범을 개발할 필요가 있으며 여전히 논의 중입니다. 은행 네트워크를 만들기 전에 샘플링, 분획 화, 테스트 및 타이핑, GCW의 저온 보존에 대한 절차 표준화에 관한 많은 조항과 문서를 채택 할 필요가 있습니다. GSK 은행의 효과적인 운영을위한 필수 조건은 세계 기금 수급 협회 (WMDA) 및 미국 국가 기금 수급 계획 (NMDP)의 레지스트리와 상호 관련되는 컴퓨터 기반의 조직입니다.

또한, 조혈 줄기 세포 (주로 조혈 줄기 세포)의 HSC 확장 방법을 최적화하고 표준화하는 것이 필요합니다. HLA 시스템과 호환되는 잠재적 인 수혜자의 수를 늘리려면 HSC 제대혈을 번식해야합니다. 소량의 제대혈이 있기 때문에, HSC의 함량은 일반적으로 성인 환자에서 골수 재생을 제공 할 수 없습니다. 동시에 무관 한 이식 수술을 수행하기 위해서는 충분한 수의 전형적인 GSK 샘플 (1 명의 수혜자 당 10,000-1,500,000)에 접근 할 필요가 있습니다.

줄기 조혈 세포의 이식은 골수 이식에 수반되는 합병증을 제거하지 못합니다. 이 분석은 제대혈 줄기 세포의 이식에서 심한 형태의 급성 이식편 대 숙주 반응이 23 %, 수혈자의 25 % 만성적으로 발생한다는 것을 보여줍니다. Oncohematological 환자에서 HSC 제대혈을 이식 한 후 1 년 이내에 급성 백혈병의 재발이 26 %의 경우에서 관찰됩니다.

최근, 말초 조혈 줄기 세포의 이식 방법이 집중적으로 발전해왔다. 말초 혈액에서 HSC의 함량은 매우 작아 (100,000 개의 혈액 세포 당 1 GSK), 특별한 준비가없는 격리는 의미가 없습니다. 따라서, 기증자는 이전에 조혈 골수 세포가 혈액으로 방출되는 것을 약물 자극의 과정으로 제공 받았다. 이를 위해 싸이클로 포스 파 미드 (cyclophosphamide)와 과립구 콜로니 자극 인자 (granulocyte colony-stimulating factor)와 같은 아주 무해한 약물이 사용됩니다. 그러나 말초 혈액에서 HSC를 동원하기위한 절차 후에도 CD34 + 세포의 함량은 1.6 %를 초과하지 않습니다.

클리닉에서 HSC를 동원하기 위해 C-CEC가보다 일반적으로 사용되며, 이는 뼈에 통증이 거의 규칙적으로 나타나는 것을 제외하고는 비교적 양호한 내약성을 특징으로합니다. 현대의 혈액 분리기를 사용하면 조혈 줄기 세포를 효율적으로 분리 할 수 있습니다. 그러나 정상적인 조혈 상태에서 골수 슬러리의 재생 능력과 비교하여 충분한 수의 조혈 모세포를 얻기 위해서는 적어도 6 회의 절차가 수행되어야한다. 이러한 각 절차를 통해 분리기는 혈소판 감소증과 백혈구 감소증을 유발할 수있는 10-12 리터의 혈액을 처리합니다. 분리 절차는 기증자에게 항응고제 (시트르산 나트륨)를 투여하는 것을 포함하지만, 체외 원심 분리 동안 혈소판의 활성화와 접촉하는 것을 배제하지는 않는다. 이러한 요소들은 전염성 및 출혈성 합병증의 발병을위한 조건을 만듭니다. 이 방법의 또 다른 단점은 말초 혈액 헌혈자에서 HSC의 함량을 모니터링하고 최대 수준을 결정하는 데 필요한 동원 반응의 상당한 변동성에 있습니다.

동종 제제와 달리 HSC의자가 이식은 거부 반응의 발달을 완전히 배제합니다. 그럼에도 불구하고 줄기 조혈 세포의자가 이식 (autotransplantation)으로 인한 징후의 범위를 제한하는자가 이식 (autotransplantation)의 중요한 단점은 백혈병 클론 세포에 이식편을 재 접혈 할 확률이 높다는 것입니다. 또한, 면역 매개 "이식편 대 종양"효과의 부족은 악성 혈액 질환의 재발 빈도를 상당히 증가시킵니다. 따라서 유일한 클론 조혈 종양의 급진적 인 제거의 방법과 골수이 형성 증후군에서 정상 클론 조혈를 복원 동종 HSC 이식 집중적 인 화학 요법입니다.

그러나이 경우조차도 대부분의 혈종 모세포 증의 치료는 환자의 생존 기간을 늘리고 삶의 질을 향상시키는 데 그 목적이 있습니다. 몇몇 대규모 연구에 따르면 HSC 이식 수술 후 무병 생존 기간 연장은 온 콜라 메틱 환자의 40 %에서 달성됩니다. HbA 양립성 형제 줄기 세포를 사용할 때, 병력이 짧은 젊은 환자, 최대 10 %의 돌풍 세포 수 및 유리한 세포 유전학을 가진 환자에서 가장 좋은 결과가 관찰됩니다. 불행히도, 골수 이형성 질환 환자에서 HSC 동종 이식 수술과 관련된 사망률은 여전히 높습니다 (대부분의 보고서에서 약 40 %). 국립 골수 기증자 프로그램 (510 명의 환자, 중간 연령 - 38 세)의 10 년 연구 결과는 2 년간 무병 생존율이 29 %이며 재발 가능성은 상대적으로 낮았다 (14 %). 그러나 비 관련 기증자의 GSC 이식 수술로 인한 사망률은 매우 높으며 2 년 동안 54 %에 이릅니다. 유럽 연구 (118 명의 환자, 24 세 중앙값, 2 년 무 재발 생존율 28 %, 재발률 35 %, 사망률 58 %)에서도 비슷한 결과가 나왔다.

동종 조혈 모세포에 의한 조혈 복원으로 화학 요법의 집중적 인 과정을 수행 할 때 종종 면역계 및 수혈 합병증이 발생한다. 여러면에서, 이들은 인간의 혈액 그룹이 MHC 분자와 독립적으로 유전된다는 사실과 관련이 있습니다. 따라서 기증자와 수혜자가 주요 HLA 항원과 양립 할지라도 적혈구의 표현형이 다를 수 있습니다. "큰"호환성 할당시 도너 적혈구 항원받는 항체 전세에 존재하고, "작은"때 수신자의 적혈구 항원 도너 항체. "큰"및 "작은"비 호환성의 조합이있는 경우가 있습니다.

골수와 혈액 악성 종양의 탯줄 혈액 동종 이식의 조혈 줄기 세포의 임상 효능의 비교 분석의 결과는 어린이 동종 이식 GSK의 제대혈은 크게 "호스트 이식편 대"반응의 위험을 감소 나타냅니다 만, 호중구 및 혈소판의 회복의 긴 기간이있다 이식 후 100 일의 사망 빈도가 높습니다.

초기 치사의 원인에 대한 연구는 GSK의 동종 이식에 대한 금기 사항을 명확히하는 것을 가능하게했으며, 가장 중요한 것은 다음과 같다.

• 수혜자 또는 기증자에게 시토 메갈로 바이러스 감염에 대한 양성 검사의 존재 (예방 치료를 수행하지 않음);
• 급성 방사선 병;
• 환자에서 진균 감염의 존재 여부 또는 의심 (살균제로 전신 조기 예방 제외);
• 환자가 세포 성 증후군으로 장기간 치료를받는 (혈소판 갑작스런 심장 마비 및 다발성 장기 부전의 높은 확률)
• HLA- 동일하지 않은 공여자로부터의 이식 (사이클로스포린 A에 의한 급성 "숙주에 대한 이식"예방없이);
• 만성 바이러스 성 C 형 간염 (간에서 veno-occlusive disease를 일으킬 위험이 높음).

따라서, 조혈 모세포 이식은 종종 사망을 초래할 심각한 합병증을 일으킬 수 있습니다. 기간 (최대 100일 이식 후) 초기에 이들뿐만 아니라 의한 조절 요법 독성, 조직 손상, 간 질환 venookklyuzionnaya 급성 반응 "숙주 대 이식편"이식 거부 (neprizhivlenie HSC 공여체), 감염성 합병증을 포함하는 높은 특성에 대한 리모델링의 비율 (피부, 혈관 내피 세포, 장 상피). 후반 이식 후 기간의 합병증은 "이식 호스트 대"기본 질병의 재발, 어린이 성장 지연, 장애 생식 기능과 갑상선 안 질환의 만성적 인 반응을 포함한다.

최근, 골수 세포의 소성에 관한 출판물의 출현과 관련하여, GSK를 심장 마비 및 다른 질병의 치료에 사용하는 아이디어가 생겨났다. 동물에 대한 일부 실험에서도이 가능성을지지하지만 골수 세포의 가소성에 대한 결론을 확인해야합니다. 이 상황은 인간의 골수 이식 된 세포가 골격근, 심근 또는 CNS의 세포로 쉽게 변형된다고 믿는 연구자들에 의해 고려되어야한다. GSKs가 이들 기관의 자연 재생 세포원이라는 가설은 심각한 증거가 필요합니다.

특히, 목적 오픈 무작위 시험 Belenkova V. (2003)의 첫 번째 결과 발표 - C-SIS의 효과를 연구하기 위해 (즉,자가 혈액 조혈 모세포 동원) 중증의 만성 심부전 중등도 임상 적, 혈역학 환자의 neurohumoral 상태에서, 뿐만 아니라 표준 요법 (ACE 억제제, 베타 차단제, 이뇨제, 강심 배당체)과의 안전성 평가 등. 연구 프로그램의 저자의 결과의 첫 번째 간행물은 O-CBP에 찬성하는 유일한 인수가이 약으로 치료하는 동안 모든 임상 및 혈역학 적 매개 변수의 여지가없는 개선을 발견 한 환자의 치료 결과가 있습니다. 그러나 이후 경색 영역에서 심근의 재생 다음 혈류에 조혈 모세포 동원의 이론은 확인되지 않았습니다 - 심지어 환자에서 도부 타민과 스트레스 심 초음파의 긍정적 인 임상 역학 분야의 흉터 지역에서 생존 심근의 출현을 공개하지 않았다.

현재로서는 일상적인 임상 진료에 널리 도입하기 위해 대체 세포 치료법을 권장 할 수있는 데이터만으로는 충분하지 않다는 점에 유의해야합니다. 임상 연구의 잘 만들어진 질적 성능은 재생 플라스틱 치료와 기존의 수술이나 보존 적 치료의 결합 된 사용에 대한 다양한 재생 세포 치료, 그것에 표시 및 금기의 개발의 옵션과 가이드 라인의 효과를 확인합니다. 지금까지 골수 세포 (조혈 줄기 또는 기질)의 인구의 어떤 종류의 질문에 대한 응답이 신경 세포 및 심근을 초래하지 않으며,이 생체에 기여하는 것을 조건 명확하지 않다 수 있습니다.

이 분야에서 일하는 것은 많은 나라에서 이루어지고 있습니다. 급성 간부전 간 이식과 함께 치료의 유망한 방법 중 미국 국립 보건원에 심포지엄의 요약하면, 이식은 간 세포와 크세논 또는 동종 간세포 및 체외 생물 반응기 연결을 표시했다. 외래성, 기능적으로 활동적인 간세포 만이 수혜자의 간을 효과적으로 지원할 수 있다는 직접적인 증거가 있습니다. 분리 된 간세포를 임상 적으로 사용하기 위해서는 세포가 분출 될 때까지의 시간을 현저히 단축시킬 세포 은행을 만들어야합니다. 격리 된 hepatocytes의 은행을 만드는 가장 수용 가능한 액체 질소에 간 세포의 cryopreservation입니다. 급성 및 만성 간부전 환자에서 클리닉에서 이러한 세포를 사용하면 다소 높은 치료 효과가 나타났다.

실험 및 병원에서 간 세포의 이식의 긍정적 인 격려 결과에도 불구하고, 많은 문제가 해결되는 지금까지 아직도 여전히 존재한다. 이러한 격리 간세포를 분리 충분히 효과적인 방법을 얻기에 적합한기구의 제한된 양, 간 세포를 이식 세포의 성장 및 증식의 조절 메커니즘 퍼지 이해를 보존하는 표준화 된 방법의 부족 등, 적절한 방법에 생착 평가 또는 동종 간세포의 제거의 결여. 이것은 또한 동소 간 이식에서보다 덜하지만, 그러나 절연 간세포 또는 특수 가공 효소 캡슐, 면역 억제제의 적용을 요구하는 동종 또는 이종 세포를 이식하여 면역성의 존재를 포함한다. 간세포 이식은 종종 cytostatics의 사용을 필요로하는 거부 반응에서받는 사람과 기증자 사이의 면역 충돌로 이어집니다. 이 문제를 해결하는 한 가지 방법은 호스트 예방 접종에도 불구하고, 캡슐 막 효과적으로 간세포를 보호하기 때문에, 자신의 생존을 향상시킬 간 세포를 분리하기 위해 고분자 미세 미디어를 사용하는 것입니다.

그러나, 급성 간부전 등 간세포 이식으로 인해 공정 최적 기능에 액세스하여 새로운 환경에서 간 세포의 생착에 필요한 약간 긴 시간에는 영향을 미치지 않는다. 전위 제한 절연 간세포 이식 이소성 담즙 분비하며, 바이오 리액터를 사용하는 경우 중요한 생리 배리어 인간 간세포 이종 단백질을 생산하는 단백질 종 사이의 어긋남을 작용한다.

골수 간질 줄기 세포의 국소 이식은 골 결손의 효과적인 교정에 기여하며,이 경우 뼈 조직의 복원은 자발적인 회복 재생보다 더 집중적으로 일어난다는 문헌이있다. 실험 모델에 대한 몇몇 전임상 연구는 정형 외과에서 골수 간질 골수 이식을 사용할 가능성을 설득력있게 보여 주었지만, 가장 단순한 경우에도 이러한 기술을 최적화하기위한 추가 작업이 필요합니다. 특히, 생체 내에서 골 형성 간질 세포의 팽창을위한 최적의 조건은 아직 발견되지 않았으며, 이상적인 담체 (매트릭스)의 구조 및 조성은 그대로 유지된다. 벌크 뼈 재생에 필요한 최소 세포 수는 결정되지 않습니다.

Mesenchymal 줄기 세포 transgermal 소성 - phenotypically 원래 줄의 세포와 관련이없는 세포 유형으로 차별화하는 능력을 증명한다. 최적의 조건 하에서 가능한 골수 흡 인물 1 ㎖에서 기질 세포의 수 십억 수신하게 50 개 이상의 구획에 대한 시험 관내에서 유지 골수 간질 세포의 클론 줄기 세포주 배양. 그러나 콜로니 크기, 세포 유형의 형성 및 형태의 다양한 서로 다른 속도의 변화 자체를 명시한다 이질성 특징으로하는 중간 엽 줄기 세포 집단 - 섬유 아세포에서 같은 방추형 대형 평면 셀. 표현형 이질성을 관찰 배양 기질 줄기 세포 3 개월 이내 : 하나 개의 식민지가, 뼈 조직의 결절을 형성하는 동안 다른 사람 - 지방 세포의 클러스터 및 연골의 다른 더 희귀 형성하는 섬.

중추 신경계의 퇴행성 질환 치료를 위해, 배아 신경 조직의 이식이 먼저 사용되었다. 최근에는 배아 뇌의 조직 대신에 신경줄 기세포에서 유래 된 신경 구의 세포가 이식되었다 (Poltavtseva, 2001). Neurospheres는 투입된 신경 전구체와 신경 아세아를 포함하고 있습니다. 이것은 이식 후 잃어버린 뇌 기능의 회복을 가능하게합니다. Neurosphere를 행 세포 이식 후 분산 래트 뇌 선조체 체 gemiparkinsonizmom 실험 쥐 모터 비대칭 제거 도파민 신경 세포로 증식 및 분화를 표시. 그러나 어떤 경우에는 종양 세포가 신경 구의 세포에서 발생하여 동물의 죽음을 초래했다 (Bjorklund, 2002).

환자도 의사도 그들 (이중 맹검)을보고 알고 있었다있는 환자를 두 그룹의 클리닉주의 연구는 환자의 한 그룹은 도파민을 생산하는 신경 세포와 배아 조직을 이식 환자의 두 번째 그룹은 거짓 단계를 만든 예기치 않은 결과를 준 . 배아 신경 조직으로 이식 된 환자는 대조군 그룹의 환자보다 좋지 않았다. (... 건강 미국의 과학 발전과 미래 연구 방향 냇 INST 줄기 세포) 또한, 배아 신경 조직의 이식 후 33 명 중 5 후 2 년이 통제 환자 그룹 없었다 지속적인 운동 장애를 개발했다. 뇌의 신경 줄기 세포의 임상 연구의 미해결 문제 중 하나는 실제 전망과 CNS 장애의 교정을위한 이들의 유도체 이식의 제한의 분석이다. 이는 장기간 발작 간질의 진보 발전 요소가 될 수있다 그 구조적 및 기능적 변화를 초래 해마 neyronogenez 유도하는 것이 가능하다. 이 성인 뇌에서 새로운 뉴런의 생성 및 비정상적인 시냅스 연결의 형성의 부정적인 효과를 포인트로서 이러한 결론은 특히 주목할 만하다.

그들은 세포주기의 조절에 변화 가까이 발생할 때 우리는 무기한으로 분할 할 수있는 능력을 결정, 사이토 카인 (미토 겐)와 함께 배양 배지에서 종양 세포의에 줄기 세포의 특성을 근사 잊지한다. 이 경우 배아 줄기 세포의 초기 파생물을 인간에게 이식하는 것은 어리석은 일입니다.이 경우 악성 신 생물의 발달에 대한 위협이 매우 크기 때문입니다. 차별화 된 선조 세포를 사용하는 것이 훨씬 안전합니다. 그러나, 현재 올바른 방향으로 분화하는 안정한 인간 세포주를 얻기위한 신뢰할 수있는 기술은 아직 개발되지 않았다.

줄기 세포 수정을 통한 유전 병리학 및 인간 질병의 교정을위한 분자 생물학 기술의 사용은 실용 의학에 큰 관심을 끈다. 줄기 세포 게놈의 특징은 유전 질환을 교정 할 목적으로 독특한 이식 계획을 개발할 수있게합니다. 그러나이 방향에서 줄기 세포의 유전 공학의 실제 적용이 시작되기 전에 극복해야 할 많은 한계가 있습니다. 우선 생체 외 줄기 세포 게놈 변형 과정을 최적화하는 것이 필요합니다. 줄기 세포의 증식 (3-4 주)이 그들의 형질 전환을 감소시키는 것으로 알려져 있으므로 유전자 조작의 높은 수준을 달성하기 위해서는 몇 차례의 형질 감염이 필요합니다. 그러나, 주된 문제는 치료 유전자의 발현 지속 기간과 관련이있다. 지금까지는 어느 연구에서도 수정 된 세포의 이식 후 효과적인 발현 기간이 4 개월을 초과하지 않았다. 시간이 지남에 따라 100 %의 경우, 형질 전환 된 유전자의 발현은 프로모터의 불 활성화 및 / 또는 변형 된 게놈을 갖는 세포의 죽음으로 인해 감소된다.

중요한 문제는 의학에서 세포 기술을 사용하는 데 드는 비용입니다. 예를 들어, 연간 50 건의 이식을 수행하기 위해 고안된 골수 이식 부서의 의료 비용에 대한 연간 예상 자금 소요는 약 900,000 달러입니다.

임상 의학에서의 세포 기술 개발은 여러 분야의 과학 및 임상 센터와 국제 사회의 건설적인 협력을 필요로하는 복잡하고 다단계의 과정입니다. 동시에, 세포 치료 분야의 과학 연구 조직에 특별한주의를 기울입니다. 이 중 가장 중요한 것은 임상 시험을위한 프로토콜 개발, 임상 데이터의 유효성 모니터링, 국가 연구 등록부의 형성, 다기관 임상 시험의 국제 프로그램에의 통합 및 결과의 임상 실습으로의 도입입니다.

세포 이식 문제에 대한 소개를 결론, 나는 과학의 다양한 분야에서 우크라이나의 최고의 전문가의 공동 노력 실험 및 임상 연구에 상당한 진전을 보장하고 장기 이식을 필요로 심각하게 아픈 사람들을 돕는 효과적인 방법을 찾기 위해 앞으로 수 있다는 희망을 전하고 싶습니다 , 조직 및 세포.

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