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유전병 진단을위한 분자 유전학 방법
최근 리뷰 : 23.04.2024
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DNA 기술 방법은 특정 형태의 유전 병리의 기원을 담당하는 돌연변이 유전자의 특정 염색체에서의 위치를 결정하는데 사용된다. DNA의 기본 구조에 손상 (돌연변이에 관계없이 자신의 위치 및 각각의 생존에 미치는 영향의 DNA 서열의 모든 변화에 의해 이해된다) 후 중기 환자 염색체 제제 상속 프로빙 질환 설정할 수 - 유전자는 DNA 세그먼트 유전자 돌연변이 때문에 병리학 적 유전자의 국소화. 분자 유전학의 방법이 변경된 DNA 구조에서 질병을 진단의 가능성을 만들기 위해, 그들은 유전 질환의 현지화를 확인 할 수 있습니다. 분자 유전학 방법은 심지어 단일 염기의 치환과 관련된 돌연변이를 나타낼 수 있습니다.
유전자 식별에서 가장 중요한 단계는 유전자의 분리이다. DNA는 핵을 포함하는 모든 유형의 조직 및 세포에서 분리 할 수 있습니다. DNA 분리의 단계는 세포 소기관 및 세포막, 효소 단백질의 파괴 및 에탄올 침전에 의해 페놀 및 클로로포름, DNA 농도를 갖는 용액에서 그들의 추출 단편의 제거와 원심 분리에 의해 세포의 빠른 분해를 포함한다.
유전 실험실에서 DNA는 가장 흔히 혈액 백혈구에서 분리되며, 환자는 항응고제 (헤파린)가 포함 된 멸균 된 튜브에서 5 ~ 20ml의 정맥혈을 채취합니다. 그런 다음 백혈구를 위에서 설명한 단계에 따라 분리하고 처리합니다.
연구에 소재 제조의 다음 단계 - 제한 엔도 뉴 클레아 (제한 효소) - 엄격 특정 염기 서열 부위에서 DNA 단편으로 "컷"박테리아 효소에 의해 수행된다. 제한 효소는 이중 가닥 DNA 분자 및 제한 부위로 불리는 이들 서열의 단편으로 분리 지역화 사이트에 특정 서열 4-6, 8-12 이상의 뉴클레오티드를 인식한다. 생성 된 제한 DNA 단편의 수는 제한 부위의 빈도에 의해 결정되며, 단편의 크기는 원래 DNA 분자의 길이에 따른 이들 부위의 분포에 의해 결정된다. 제한 사이트가 더 자주 위치할수록 제한 후 DNA 단편이 짧아집니다. 현재 박테리아 기원의 제한 효소는 500 가지가 넘으며, 각각의 효소는 특정 염기 서열을 인식합니다. 미래에는 제한 효소가 DNA의 유전 적 표지자로 사용될 수 있습니다. 제한의 결과로 형성된 DNA 단편은 아가로 오스 또는 폴리 아크릴 아미드 겔에서 전기 영동에 의해 길이를 따라 정렬 될 수 있고, 따라서 그들의 분자량이 결정될 수있다. 일반적으로 특정 염색법 (더 자주 ethidium bromide)을 사용하여 젤의 DNA를 검출하고 스펙트럼의 자외선 영역의 투과광에서 젤을 관찰합니다. DNA 현지화 위치는 붉은 색입니다. 그러나, 여러 가지 DNA 제한 처리에서 사용자들이 전기 영동에 의해 분리하지 서로 다른 길이의 많은 조각을 형성 엔도 뉴 클레아 제, 그 시각 (겔의 길이에 걸쳐 제조 된 균일 한 착색) electrophoregram하는 각 DNA 단편을 확인하는 것은 불가능하다. 따라서, 표지 된 DNA 프로브와의 혼성화 방법을 사용하여 그러한 겔에서 목적하는 DNA 단편을 동정한다.
DNA 또는 RNA의 모든 단일 가닥 세그먼트는 상보 적 사슬에 결합 (하이브리드 화) 할 수 있으며, 구아닌은 항상 티민과 함께 시토신, 아데닌과 관련되어있다. 이것이 이중 가닥 분자의 형성입니다. 복제 유전자의 단일 가닥이 방사성 표지로 표지된다면 탐침이 얻어진다. 이 프로브는 DNA의 상보 적 부분을 발견 할 수 있으며, 이는 라디오 오 토 그래피 (radioautography)로 쉽게 확인됩니다. 뻗어있는 염색체의 약물에 추가 된 방사성 탐침은 유전자가 특정 염색체에 국한 될 수있게 해줍니다. 특정 DNA 샘플은 서던 블 롯팅에서 DNA 프로브로 확인할 수 있습니다. 하이브 리다이 제이션 (hybridization)은 DNA의 테스트 부분이 정상 유전자를 포함하는 경우에 발생합니다. 비정상적인 염기 서열이 존재하는 경우, 즉 상응하는 염색체 구조가 돌연변이 유전자를 포함하는 경우, 병리학 적 유전자의 위치를 결정할 수있는 혼성화가 일어나지 않을 것이다.
DNA 프로브를 얻기 위해 유전자 클로닝 방법이 사용된다. 방법의 본질은 DNA 단편을 박테리아 복제 입자, 일반적으로 세균 플라스미드에 삽입 된 유전자의 임의 유전자 또는 영역에 대응하는 (균체 원형 염색체 외 DNA의 존재 및 항생제 내성 유전자를 운반하는) 다음 것을 이루어져 인간 유전자가 내장 된 플라스미드를 갖는 유전자가 증폭된다. 인해 합성 프로세스는 그 사람의 유전자 또는 일부의 사본 플라스미드 수십억을 얻을 수있다.
또한, 방사성 표지 또는 형광 색소로 표지 된 DNA 사본은 연구 된 DNA 분자 풀 중에서 상보적인 서열을 검색하기위한 탐침으로 사용됩니다.
현재, 유전자 변이의 진단을 위해 DNA 탐침을 사용하는 많은 종류의 방법이있다.
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