비뇨기과에서의 면역학 연구

비뇨기과 환자에게 면역촬영술을 처방한다는 것은 담당 의사가 면역 체계 질환의 존재를 의심한다는 것을 의미합니다. 재발성 세균, 바이러스, 진균 감염, 알레르기 증상, 전신 질환은 이러한 질환의 징후일 수 있으며, 이러한 질환은 여러 증후군(감염성, 종양성, 알레르기성, 자가면역성, 림프증식성)으로 특징지어집니다. 한 환자에게 여러 증후군이 나타날 수 있습니다. 예를 들어, 만성 감염성 질환(감염성 증후군)은 면역결핍을 유발할 수 있으며, 면역결핍은 감염성 및 종양성 질환(종양성 증후군)에 대한 소인으로 나타날 수 있습니다. 감염에 대한 소인은 백혈병과 같은 림프증식성 질환의 결과로 발생한 이차성 면역결핍을 배경으로 발생할 수 있습니다. 면역 체계의 병리학적 변화는 크게 세 가지로 나눌 수 있습니다.

• 면역 체계의 한 부분 또는 다른 부분의 양적 또는 기능적 결핍으로 인해 면역 결핍 상태가 발생하는 현상입니다.
• 면역 체계가 항원을 인식하는 데 장애가 생겨 자가면역 과정이 발병하는 질환입니다.
• 알레르기 질환이 발병하는 것으로 나타나는 과민성 또는 "변태적인" 면역 반응입니다.

면역진단에는 선별검사(1단계 검사)와 진단검사(2단계 검사)가 있습니다. 선별검사는 면역 체계 장애를 기록하기 위한 것이고, 진단검사는 추가적인 면역 교정을 위해 검사 시행에 관여하는 기전을 규명하기 위한 것입니다.

B세포 면역

스크리닝 방법

• B 세포 항원(CD19, CD20, 여기서 CD는 분화 클러스터)에 대한 단일클론 항체를 이용하여 면역형광법 또는 유세포 형광분석법을 사용하여 B 림프구의 상대적 및 절대적 수를 측정합니다. 성인의 B 림프구 정상 함량은 총 백혈구 수의 8~19% 또는 190~380 cells/μl입니다. B 림프구 함량 증가는 급성 및 만성 세균 및 진균 감염, 만성 간 질환, 전신 결합 조직 질환, 만성 림프구성 백혈병, 골수종에서 발생합니다.
• 비특이적 면역글로불린(F, M, G, E) 농도는 단순 방사면역확산법, 비탁법 또는 터보법, 방사면역측정법 또는 효소면역측정법(ELISA)을 통해 측정합니다. 성인 기준: 면역글로불린(Ig) A 0.9-4.5 g/L, IgM 0.3-3.7 g/L, IgG 8.0-17 g/L. 면역글로불린 농도는 B 림프구 함량 증가와 동일한 병리학적 조건에서 증가합니다. 면역글로불린 농도는 선천성 저감마글로불린혈증, 면역계 신생물, 비장 제거, 단백질 손실, 신장 또는 장 질환, 세포 증식 억제제 및 면역억제제 치료 시 감소합니다.

명확한 방법

• 폴리에틸렌 글리콜에 선택적으로 침전시킨 후 분광광도계 밀도 검사(정상 80-20 U)를 통해 혈액 내 순환 면역 복합체를 측정합니다. 순환 면역 복합체 증가는 급성 세균 감염, 진균 감염, 바이러스 감염, 자가면역 질환, 면역 복합체 질환, 혈청병, 제3형 알레르기 반응에서 전형적으로 나타납니다.
• ELISA 또는 방사형 면역 확산법을 사용하여 혈액 내 특정 면역글로불린을 박테리아 및 바이러스 항원, 자가면역 질환의 디옥시리보핵산(DNA), 항정자 항체(자가면역 불임) 및 항신장 항체(신우염 및 사구체신염)와 관련하여 결정합니다.
• 정자 내 항정자 항체 측정[MAR 검사(혼합 항글로불린 반응)], 정상 - 음성 결과.
• 신우염과 사구체신염의 감별 진단을 목적으로 소변 내 면역글로불린 농도를 측정합니다(단백뇨의 선택성).
• ELISA(방사면역확산법)를 사용하여 알레르기성 전립선염을 진단하기 위해 전립선액에서 IgE 함량을 측정합니다.
• B 림프구 폭발 전환 반응에서 B 세포 미토겐에 대한 반응에 대한 연구(T 림프구 존재 하에서 B 림프구 폭발 전환 반응 자극을 위한 포크위드 미토겐)의 표준값은 95-100%입니다.

면역의 T세포 연결

스크리닝 방법

• 면역형광 반응 또는 단일클론 항-CD3 항체를 이용한 유세포 형광 측정법을 통해 성숙 CD3 T-림프구의 상대적 및 절대적 수를 측정합니다. 성인의 정상 수치는 58-76% 또는 1100-1700개/μl입니다. T-림프구 수 감소는 면역 세포 연결망의 부족을 나타냅니다. 이는 일부 2차 및 1차 면역결핍증(만성 세균 및 바이러스 감염: 결핵, 후천성 면역결핍 증후군, 악성 종양, 만성 신부전, 외상, 스트레스, 노화, 영양실조, 세포 증식 억제제 치료, 이온화 방사선 노출)에서 전형적으로 나타납니다. T-림프구 수의 증가는 면역 과활성 또는 림프구 증식성 질환의 배경에서 발생합니다. 염증이 발생하면 T-림프구 수가 먼저 증가했다가 감소합니다. T-림프구 감소가 없으면 만성 염증 과정을 나타냅니다.
• 림프구 하위 집단의 평가.
  • T-헬퍼(항-CD4 항체) 수 측정. 정상 세포 수는 36-55% 또는 400-1100개/mcl입니다. 자가면역 질환, 발덴스트롬병, 항이식 면역 활성화 시 이 세포 수의 증가가 나타납니다. 만성 세균, 바이러스, 원충 감염, 결핵, 후천성 면역결핍 증후군, 악성 종양, 화상, 손상, 영양실조, 노화, 세포 증식 억제제 치료, 전리방사선 노출 시 T-헬퍼 세포 수의 감소가 나타납니다.
  • T-억제자(항-CD4 항체) 수 측정. 일반적으로 17-37% 또는 300-700개/μl입니다. T-헬퍼 항체 수가 감소하는 동일한 조건에서는 T-억제자 수가 증가하고, T-헬퍼 항체 함량이 증가하는 동일한 조건에서는 T-억제자 수가 감소합니다.
  • 면역 조절 지수 CD4/CD8은 일반적으로 1.5~2.5입니다. 2.5 이상인 경우 과잉 활동(알레르기 및 자가면역 질환); 1.0 미만인 경우 저활동(만성 감염 소인). 염증 과정 초기에는 면역 조절 지수가 증가하고, 감소하면 정상화됩니다.

명확한 방법

• 자연살해세포(NK 세포) 수 측정 - 항CD16 및 항CD56 항체. CD16 림프구의 정상 수치는 6~26%, CD56 림프구의 정상 수치는 9~19%입니다. NK 세포 수는 이식 거부 반응 시 증가하며, 바이러스 감염, 암, 원발성 및 이차성 면역결핍증, 화상, 부상, 스트레스, 세포독성제 치료 및 전리방사선 노출 시 감소합니다.
• 인터루킨-2(활성화 마커) 수용체를 가진 T 림프구 수 측정 - 항-CD25 항체. 정상 수치는 10~15%입니다. 알레르기 질환, 이식 거부 반응, 급성 일차 감염 시 흉선 의존성 항원에 대한 반응에서 T 림프구 수가 증가하는 반면, NK 세포 수가 감소하는 동일한 질환에서는 T 림프구 수가 감소합니다.
• 활성화 마커인 II형 조직적합성 분자 HLA-DR의 발현 연구. 염증 과정, C형 간염, 셀리악병, 매독, 급성 호흡기 질환 환자에서 발현이 증가합니다.
• 림프구 세포자멸사 평가. 림프구의 세포자멸사 준비 상태는 세포 표면의 Fas 수용체(CD95)와 미토콘드리아의 bd-2 원암유전자 발현을 통해 대략적으로 파악할 수 있습니다. 림프구 세포자멸사는 DNA 단편에 결합하는 프로피듐 요오드화물과 세포자멸사 시작 시 세포막에 나타나는 포스파티딜세린에 결합하는 아넥신 Y의 두 가지 형광 염료로 처리하여 평가합니다. 결과는 유세포 형광 분석기를 사용하여 평가합니다. 결과는 서로 다른 염료로 염색된 세포의 비율을 기반으로 계산됩니다. 염색되지 않은 세포는 생존 가능하며, 아넥신 Y에만 결합한 세포는 세포자멸사의 초기 징후이며, 프로피듐 요오드화물과 아넥신 Y가 결합한 세포는 세포자멸사의 후기 징후입니다. 프로피듐 요오드화물만 염색된 세포는 괴사를 나타냅니다.
• 시험관내 T 림프구 증식 평가.
  • 세포 아세포 형성 변화 - 림프구 아세포 형질전환 반응. 백혈구를 식물성 미토겐(렉틴)과 함께 배양합니다. 피토헤마글루티닌을 가장 자주 72시간 동안 사용한 후, 도말 표본을 채취하여 염색하고 아세포 수를 측정합니다! 자극 지수는 실험군(피토헤마글루티닌 배양군)에서 형질전환된 세포의 비율과 대조군(피토헤마글루티닌 미배양군)에서 형질전환된 세포의 비율의 비율입니다. 림프구 아세포 형질전환 반응은 세포 분열 중 DNA 합성이 증가하기 때문에 배양된 세포에 방사성 표지(ZN-티미딘)를 첨가하여 평가할 수 있습니다. 증식 반응 장애는 감염, 암, 신부전, 수술적 처치와 관련된 원발성 및 이차성 면역결핍증 모두에서 발생합니다.
  • 이 연구에서는 휴지 상태의 T 림프구에는 거의 존재하지 않는 활성화 마커(CD25, 트랜스페린 수용체 - CD71)와 주요 조직 적합 복합체 II형 HLA-DR 분자의 발현을 평가합니다. T 림프구를 피토헤마글루티닌으로 자극하고, 3일 후 분리된 수용체에 대한 단일클론 항체를 사용하여 직접 또는 간접 면역 형광 반응, 유세포 형광 분석법을 통해 활성화 마커의 발현을 분석합니다.
  • 활성화된 T-림프구에서 합성되는 매개체(인터루킨(IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, γ-인터페론 등)의 양을 방사면역측정법(Radioimmunoassay) 또는 ELISA를 이용하여 측정합니다. 특히 활성화된 배양액 상층액과 세포 내에서 Th1 및 Th2 마커인 γ-인터페론과 IL-4의 농도를 평가하는 것이 중요합니다. 가능하다면, 생산 세포 내 기질 리보핵산(MRI) 수준과 해당 사이토카인 수용체의 발현 강도를 이용하여 해당 사이토카인의 유전자 발현을 확인하는 것이 유용합니다.
    
• 림프구 이동 억제 반응. 항원과 반응하는 감작된 T 림프구는 림프구 이동을 억제하는 인자를 포함한 림포카인을 분비합니다. 이러한 억제 현상은 세포 배양액에 미토겐을 도입했을 때 관찰됩니다. 억제 정도를 평가하면 림프구의 사이토카인 분비 능력을 판단할 수 있습니다. 일반적으로 이동 빈도는 특정 미토겐에 따라 20~80%입니다.
• NK 세포 세포독성 평가. 자연살해세포가 K-562 적혈구계 세포주의 표적 세포를 사멸시키는 능력을 측정한다. 항체 의존성 세포독성을 평가하는 경우, IgG 항체로 코팅된 표적 세포를 사용한다. 표적 세포를 3H-우리딘으로 표지하고 효과기 세포와 함께 배양한다. 표적 세포의 사멸은 방사성 표지가 용액 내로 방출되는 것을 통해 평가한다. 악성 신생물에서는 세포독성이 감소한다. 인터루킨 치료의 효과를 예측해야 하는 경우, 특정 사이토카인과 함께 배양하는 동안 NK 세포의 세포독성을 평가한다.

식세포 기능 연구

스크리닝 방법

식세포에 의한 미생물 세포의 흡수 강도 연구(라텍스 입자 식세포작용, 포도상구균, 대장균 또는 환자로부터 분리한 미생물의 시험 배양). 헤파린 처리된 혈액을 원심분리하여 백혈구 현탁액을 분리하고, 정맥 혈액형 혈청을 첨가하여 옵소닌화(옵소닌은 식세포작용을 증강시키는 단백질)를 실시합니다. 미생물 현탁액을 희석하여 백혈구와 혼합하고 120분간 배양한 후, 배양 시작 30분, 90분, 120분 후에 분석을 위한 검체를 채취합니다. 채취한 백혈구 현탁액으로 도말 검사를 실시합니다. 다음과 같은 식세포작용 지표를 측정합니다.

• 식세포작용지수 - 배양 후 30분과 120분 이내에 식세포작용에 들어간 세포의 비율입니다. 식세포작용지수(30)의 표준값은 94%, 식세포작용지수(120)는 92%입니다.
• 식세포수 - 세포 내에 위치한 세균의 평균 수입니다. 식세포수(30)의 표준값은 11%이고, 식세포수(120)는 9.8%입니다.
• 식세포 수 계수 - 식세포 수(30)와 식세포 수(120)의 비율; 일반적으로 1.16;
• 호중구 살균 지수 - 식세포 내부에서 죽인 미생물 수를 흡수된 총 미생물 수로 나눈 비율입니다. 일반적으로 66%입니다.

명확한 방법

• 니트로블루 테트라졸륨(NBT)을 이용한 시험에서 식세포의 살균력 연구 - NBT 시험. 노란색 니트로블루 테트라졸륨 염료를 백혈구에 첨가합니다. 호중구가 염료를 흡수하면 자유 산소 라디칼의 영향으로 환원 과정이 발생하여 파란색으로 변합니다. 반응은 96웰 평저 플레이트에서 수행합니다. 행크스 용액(자발적 NBT)을 NBT와 백혈구 혼합물이 있는 처음 세 웰에 첨가하고 라텍스 입자를 두 번째 웰에 첨가합니다. 혼합물을 37°C에서 25분 동안 배양합니다. 결과는 판독기에서 540nm에서 판독하고 임의의 단위로 표시합니다. 자극 계수(K _st )는 자극을 받은 웰의 광학 밀도와 자극을 받지 않은 웰의 평균 광학 밀도의 비율로 계산합니다. 건강한 사람의 경우 NBT _후원 = 90 ± 45 CU, NBT _자극 = 140 ± 60 CU입니다. K _st = 1.78±0.36.
• 접착 분자 연구. 유세포 형광 분석법을 사용하여 표면 항원 CD11a/CD18, CD11b/CD18, CD11c/CD18의 발현을 측정합니다. 접착력 저하를 동반한 면역결핍증은 재발성 감염, 느린 상처 치유, 그리고 감염 부위에 고름이 없는 것으로 나타납니다.

보체계 연구

스크리닝 방법

보체의 용혈 활성 측정은 보체 활성화의 고전적 경로를 연구하는 것입니다. 건강한 사람과 아픈 사람의 혈청을 서로 다르게 희석하여 항체로 코팅된 적혈구에 첨가합니다. 용혈 활성의 단위는 적혈구의 50%가 파괴되는 혈청 희석률의 역수입니다. 용혈 정도는 용액 내로 헤모글로빈이 방출되는 정도를 광도계로 측정하여 추정합니다. 신장 손상을 동반한 전신성 홍반성 루푸스, 급성 사구체신염, 복합 면역결핍증, 중증 근무력증, 바이러스성 간염, 림프종, 폐쇄성 황달의 증가, 하시모토 갑상선염, 류머티즘, 류마티스 관절염, 결절성 동맥주위염, 피부근염, 심근경색, 궤양성 대장염, 라이터 증후군, 통풍에서 보체의 용혈 활성이 감소하는 것으로 관찰됩니다.

명확한 방법

• 보체 성분 측정. 정량 분석은 방사면역확산법과 비탁법을 통해 수행됩니다.
  보체 성분의 항원 특성이 변하지 않는 한, 본 연구는 유익하지 않습니다.
• 보체의 Clq 성분이 식세포작용을 촉진하고 세포독성을 매개하는 것으로 알려져 있습니다. Clq의 감소는 면역 복합체 질환, 전신성 홍반 루푸스, 화농성 감염 및 종양에서 나타납니다.
• C3 성분은 고전적 및 대체 보체 경로의 활성화에 관여합니다. C3 성분의 농도 감소는 만성 세균 및 진균 감염, 순환 또는 조직 면역 복합체의 존재와 관련이 있습니다.
• C4 성분은 고전적 경로의 활성화에 관여합니다. C4 농도 감소는 면역 복합체에 의한 보체의 지속적인 활성화 및 고전적 보체 경로의 활성화를 조절하는 C1 억제제의 농도 감소와 관련이 있습니다. C4 결핍은 전신성 홍반성 루푸스에서 발생하며, C4 증가는 신장 질환, 이식 거부, 급성 염증 및 위장관 질환에서 발생합니다.
• C5a는 C5 분자의 작은 조각으로, 보체계 활성화의 결과로 분리됩니다. 염증, 패혈증, 아토피 및 알레르기 질환 시 농도가 증가합니다.
• Cl-억제제는 다기능 인자입니다. 보체 성분인 C1의 활성화를 조절하고, 칼리크레인, 플라스민, 활성화된 하게만 인자, Cls 및 Or 단백질 분해효소의 활성을 억제합니다. C1-억제제 결핍은 혈관부종을 유발합니다.
• 보체 기능 연구. 시험 혈청을 보체 성분이 없는 표준 혈청에 첨가하여 보체의 용혈 활성을 측정한다. 용혈 활성이 정상으로 회복되지 않으면, 시험 혈청 내 해당 보체 성분의 활성이 감소된 것으로 간주한다.

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